RNA试剂盒

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用于各种植物、动物、微生物的RNA提取,在每个试剂盒里都有一份说明使用说明书。实验者只需要按照说明书上的步骤操作即可。使用时无需配制其它试剂,非常方便,适合于RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、纯度高,可用于分子生物学后实验。但目前较好的试剂盒价格比较贵,在实验是可以根据...


用于各种植物、动物、微生物的RNA提取,在每个试剂盒里都有一份说明使用说明书。实验者只需要按照说明书上的步骤操作即可。使用时无需配制其它试剂,非常方便,适合于RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、纯度高,可用于分子生物学后实验。但目前较好的试剂盒价格比较贵,在实验是可以根据自己的实验需要来定夺试剂盒的使用。

  • 中文名

  • RNA试剂盒

  • 应用领域

  • 分子生物学

  • 作用

  • 提取细胞内总RNA

目录
  1. 1试剂组成

  2. 2操作步骤

  3. 3注意事项

  4. 4替代方法

RNA试剂盒试剂组成

(以离心柱型为例):

一般包括:

成分数量储藏温度
  
有效期
裂解液
  
100ml
  
2-8℃
  
一年
  
漂洗液
  
30ml
  
RT
  
一年
  
洗柱液
  
100ml
  
RT
  
一年
  
RNasefreeddH2O
  
30ml
  
RT
  
一年
  
RNasefree吸附柱
  
100个
  
RT
  
一年
  
RNasefree收集管(2ml)
  
100个
  
RT
  
一年
  

此外,还配有一份试剂盒使用说明书,根据不同的生产商,可能还配有不同的试剂,如:DNA酶、溶菌酶等。

RNA试剂盒操作步骤

1. 样品处理

a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。

b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。

c. 贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。

d. 细胞悬液:离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。

e. 血液处理:取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10分钟, 10000rpm离心1分钟。弃上清,若沉淀含有红细胞,可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。

2. 将处理后的样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复合物完全分离。

3. 向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置3-5分钟。

4. 2-8℃ 12000rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新管中,不要吸到沉淀。

5. 吸附柱前处理:在吸附柱中加入500ul 洗柱液,室温放置2分钟,2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min,弃废液。

6. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀,加入吸附柱静置2分钟,2-8 12000rpm ℃ 离心2min,弃废液。

7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min,弃废液。

8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min,弃废液。

9. 12000rpm离心2min,弃掉收集管,将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。

10. 将吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O,室温放置5min,12000rpm室温离心2min

即得到RNA。

RNA试剂盒注意事项

所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品,操作过程要小心,带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。

RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯,需电泳检测。

使用时一定要根据自己的实验需要购买专用提取试剂盒, 如果不是专用试剂盒,或许能提出RNA,但不能确保其质量以及完整性,会影响RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析、分子克隆等后续实验的结果。

当前提取效果好的是RNA提取试剂盒,但其售价较高,单次实验费用花费太大,对精度要求不高的实验没有必要购买,当然还有其它的进口试剂盒,但是均存在价格高、订货周期长的问题(如果碰上国内无货的时候,要从国外发货,会等很长一段时间)。普通的提取实验用国产的试剂盒就足以,价格不高,基本上各地均有现货,如天根(目前国内生产的试剂盒中销售面比较广的一种)等,其价格比进口试剂盒要便宜许多,且效果还不错,性价比还可以。

RNA试剂盒替代方法

当然,就RNA的提取而言,不一定试剂盒的提取效果就非常好,其实采用一些经典的RNA提取方法,效果也很不错,如:TRIZOL、EDTA等,只是试剂盒使用方便,经典的方法操作复杂一些。

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