有人做过CHO细胞的电击转染实验吗？...

有人做过CHO细胞的电击转染实验吗？

我用的是伯乐公司的电转仪。
1电转细胞的准备
1.1贴壁细胞
（1）电转前1-2天，将细胞转移至75cm2细胞培养瓶培养，至转化前使细胞汇合度约50-70%。此时细胞数约为2-10x106，而每次电转需约1-10x105个细胞。
（2）12ml PBS缓慢冲洗细胞。
（3）吸出PBS，用0.4ml胰蛋白酶消化细胞。
（4）加入10ml含血清的培养基，中和胰酶。
（5）400x离心5-7min收集细胞。
（6）用PBS、Hepes、无血清培养基等重悬细胞，使之密度为1-5x106cell/ml。
1.2悬浮细胞
基本等同1.1。
2电转化
（1）设置电转程序，或选择预设程序。
（2）将线性化的重组质粒加入电转杯，所需质粒量根据细胞不同而定，一般起始浓度为10-50ug/ml。
（3）向电击杯中加入细胞，颠转电击杯使之混匀。细胞浓度和体积的使用建议请参照表一。
（4）将电击杯放入电击槽中，脉冲电击一次。
（5）脉冲后，将细胞转移至已含0.5ml培养基的孔中
（6）轻轻晃动孔板，使细胞均匀分布，培养箱培养。
（7）电转24-48小时后，基因瞬时表达。
表一
电击杯
(cm)细胞浓度
(cells/ml)细胞体积
(µl)电击后生长条件
0.21x10610048孔板 0.5 ml 生长培养基
0.25x1064006孔板2 ml生长培养基
0.42.5x1062006孔板 2 ml生长培养基
提高质粒量至20ug以上可是转化效率达到70%以上。展开