收藏  |   举报 2016-12-15 19:49   关注:375   回答:36

求助……western条带不均匀…...

已解决 悬赏分:0 - 解决时间 2025-12-06 13:36
求助……western条带不均匀…
举报 2016-12-20 23:54

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icy_fan

实验室只有我在做WB
举报 2016-12-26 20:27

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icy_fan

实验室只有我在做WB
举报 2016-12-21 07:38
这个是上次跑的目的的条带,都是这样成块状的,而且也是条带不均匀…跑了两三次了还是这样求指导…
举报 2016-12-23 06:33
又做了一次内参 还是这样……
举报 2016-12-26 23:58

可能原因:

1,胶凝得不好

2,胶在转膜夹中被挤压变形

3,电泳电压太高,胶发热变形

举报 2016-12-18 02:32

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China13113

可能原因:

1,胶凝得不好

2,胶在转膜夹中被挤压变形

3,电泳电压太高,胶发热变形

......


谢谢解答!请问胶凝得不好需要怎么调整呢…电泳电压是100V不过实验室电压不稳经常调到A,像图片这样,电泳完了电泳液是热的。另外条带跑成这样会和样本蛋白不好有关吗?
举报 2016-12-25 10:10
第一次跑的时候反而还好一些,越往后条带越不好了,这是第一次的内参条带
举报 2016-12-19 19:00

胶的问题可以在论坛里搜下,有很多很好的分享。

是否用的使回收的抗体,可以新配再试。

样本不好也会影响条带,重新提蛋白。或用别人跑得好的样本试试,找原因。

举报 2016-12-17 14:07

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China13113

胶的问题可以在论坛里搜下,有很多很好的分享。

是否用的使回收的抗体,可以新配再试。

样本不好也会影响条带,重新提蛋白。或用别人跑得好的样本试试,找原因。

......


抗体都是用的新配的蛋白在煮沸之前在常温搁置了半个小时的样子,不知道有没有影响诶
举报 2016-12-20 11:37
icy_fan

抗体都是用的新配的蛋白在煮沸之前在常温搁置了半个小时的样子,不知道有没有影响诶

PMSF的有效时间大概就一个小时,还是尽快处理,减少酶对蛋白的影响。

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