我的目的蛋白D2,是膜表达蛋白,构建了三种载体的重组质粒,分别为CMV,pcDNA3.1,pEGFP-N1,三个重组质粒酶切正确、测序正确,也曾表达过,可以砸出相应大小的目的条带。大提过后,有近一个半月没有进行转染表达,突然发现我的质粒不能砸出目的条带了,甚至外源性的anti-Flag都砸不到(pEGFP重组质粒转染可以观察到微弱荧光,比以前较少),已经重修小提过,也重新进行了酶切,进行测序,都没有问题,现在就是砸不到条带(阳性对照的Flag每次都可以),请各位大神帮忙!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!