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pcomb3/XL1-blue/VCSM13
AMP-CP α,β-亚甲基腺苷 5'-二
可的瑞林
[VIP第1年] 指数:2
通过浦东新区市场监管局认证 
内毒素检测试剂
4'-6-DIAMIDINO-
MC3R-CRE-BLA CHO-K1 
LightShift Chemilumi| 货号： | 10102ES03 |
| 供应商： | 上海翊圣生物科技有限公司 |
| 英文名： | Hieff™ PCR Master Mix (With Dye) |
| 保存条件： | -20 ºC |
| 规格： | 1ml |
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
| 2×HieffTMPCR Master Mix (With Dye) | 10102ES03 | 1ml | -20 ºC | 30.00 |
产品描述
2× HieffTM PCR Master Mix是即用型的常规PCR预混合溶液，含有Taq DNA Polymerase，dNTP混合物，MgCl 2以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。
Mix中加入电泳缓冲液和染料，使得PCR产物可以直接进行电泳，染料的存在不会干扰扩增效率。体系中含有的保护剂使得Master Mix 4ºC条件下长期放置，或经过反复冻融后仍可维持酶的活性以及产品的稳定性。PCR产物具有3’-dA突出端，可轻松克隆至T载体。
产品信息
| 组分编号 | 产品组分 | 产品编号/规格 |
| 10102ES03(1ml) | ||
| 10102-A | 2×HieffTM PCR Master Mix (With Dye) | 1ml |
| 10102-B | 超纯水（PCR Grade） | 1ml |
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子作为模板/引物，在74ºC，30min内摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸外内酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时, DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：50 μl体系中，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的360 bp条带。
稳定性检测：
图1. 2 ×Hieff TM PCR Master Mix 分别在-20 ºC放置1年、4 ºC放置3个月、25 ºC放置1个月后，菌落PCR扩增1.2 kb片段。电泳结果显示2 × PCR Master Mix具有非常好的稳定性。
注意事项
1. 操作注意事项
由于Taq DNA Polymerase室温下也有一定的反应活性，PCR反应体系配制需在冰上进行。体系混匀后快速置于PCR仪进行反应。这样可以减少反应准备阶段的非特异扩增，有助于得到更好的PCR结果。
2. 引物设计注意事项
2.1 引物3’端最后一个碱基选择C或G；
2.2 引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
2.3 引物3’端尽量避免发卡结构的出现；
2.4 引物Tm值控制在55℃-65℃之间；
2.5 引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
2.6 引物GC含量控制在40%-60%之间；
2.7 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。
应用实例
1. 反应体系配制（50μl）：
| 模板DNA§ | optional |
| 引物1（10 μM） | 2 μl |
| 引物2（10 μM） | 2 μl |
| 2 ×HieffTM PCR Master Mix(With Dye) | 25μl |
| ddH2O | up to 50μl |
| 人基因组DNA | 0.1～1 μg |
| 大肠杆菌基因组DNA | 10～100 ng |
| λDNA | 0.5～5 ng |
| 质粒DNA | 0.1～10 ng |
| 94℃ | 5 min（预变性） | 35个循环 |
| 94℃ | 30 sec | |
| 55℃* | 30 sec | |
| 72℃ | 60 sec/kb | |
| 72℃ | 7 min（彻底延伸） |
了解更多信息请关注：www.yeasen.com 或拨打免费热线：4006-111-883
温馨提示：不可用于临床治疗。
