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狗间充质干细胞成脂肪GT707转染试剂说明
GT707转染试剂纳米技术合成，是一种多用途广谱转染试剂，可以转导DNA及SiRNA，应用于siRNA和shRNA的基因敲除实验及基因表达研究。既可以转染分裂细胞也可以转染非分裂细胞。经过反复试验，GT707转染试剂在细胞转染过程中，表现了卓越的转导性能，应用于293系列细胞、Hela细胞、HepG2细胞等多种常规细胞转染效果良好，同时可用于悬浮细胞（如293-F、CHO-S等）的转染，亦可用于In vivo动物体内的高效转染。产品货号：GT707 规格：1ml贴壁细胞操作步骤：（以6孔板转染293T细胞为例）1. 在转染前一天按每孔3～5×105个细胞接种细胞。转染前2~4小时，细胞培养基换成无双抗、无血清完全培养基。转染时细胞密度在70-90％为宜。2. 转染复合物的制备：（1）取2μg DNA 用100μl无血清稀释培养基（建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或RPMI1640）稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。 （2）取10μl GT707转染试剂加入100μl不含血清和抗生素的培养基中，充分混匀。室温静置5分钟。（3）将GT707稀释液滴加到DNA稀释液中，轻轻混匀, 室温孵育 10-15 分钟，从而获得222 μl GT707/DNA 复合物。注意！: 两种溶液的混合顺序对转染结果非常重要，切勿颠倒顺序。3. 转染 ：将转染复合物加入到含有细胞和完全培养基的6孔板中，轻柔混匀,培养4～6小时后更换无血清培养基，于37℃ ，5% CO2培养箱中继续培养24～48h。注意！: 转染后首次换液时间至少需4小时以后，视培养基消耗情况可以适当延长可增加转染效率，如果培养基发黄，需尽快更换培养基。
培养容器 培养面积 需要培养基的量 稀释用培养基的量 DNA转染 RNAi转染 DNA GT707 RNA GT70796孔板 0.3cm2 100ul 10ul 0.1ug 0.3～0.6ul 5pmol 0.1～0.2ul48孔板 0.7 cm2 200ul 15ul 0.2ug 0.6～1.2ul 10pmol 0.2～0.4ul24孔板 2cm2 500ul 20ul 0.4ug 1.2～2.4ul 20pmol 0.4～0.8ul12孔板 4cm2 1ml 50ul 0.8ug 2.4～4.8ul 40pmol 0.8～1.6ul6孔板 10cm2 2ml 100ul 2ug 6～12ul 100pmol 2.0～4.0ul60mm平皿 20cm2 5ml 0.25ml 4ug 12～24ul 200pmol 4.0～8.0ul100mm平皿 60cm2 15ml 1.5ml 8ug 24～48ul 600pmol 12～24ul125ml摇瓶 30ml 3ml 50～120ul 30～50ul备注：1、“稀释用培养基的量”指稀释DNA（或RNA）及培养基的培养基用量。如6孔板转染时，分别用100ul的培养基稀释DNA及培养基。2、如用于同时共转染多种质粒，DNA的用量指每种质粒用量的总和，这时如需得到较高转染效率，建议将DNA的用量和转染试剂的用量同步提高2-3倍。
悬浮细胞操作步骤：（以转染30ml CHO-S细胞为例）1. 在转染前一天按6～7×105个细胞/ml接种细胞，待转染时细胞密度应在1×106个细胞/ml。2. 转染复合物的制备：（1）取20μg DNA 用3ml无血清稀释培养基稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。 （2）取100μl GT707转染试剂加入3ml不含血清和抗生素的培养基中，充分混匀。室温静置5分钟。（3）将3ml GT707稀释液滴加到3ml DNA稀释液中，轻轻混匀, 室温孵育 10-15 分钟，从而获得6ml GT707/DNA 复合物。
3. 转染 ：将6ml GT707/DNA 复合物加入到含有30ml细胞和无血清完全培养基的125ml摇瓶中，轻柔充分混匀，125rpm，37℃ ，8% CO2细胞培养摇床中继续培养24～96h。
转染条件优化：由于DNA和转染试剂的用量比值是决定转染效率的重要因素，同时由于各实验室质粒的定量误差，质粒纯化程度不同以及细胞状态不同，造成不同细胞和实验室的最优实验条件的差异，为取得最高的转染效率，初次应用时，建议先进行优化。最优条件确定后，实验的结果将非常稳定。下表列出了在24孔板的优化方案，供参考。
