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土壤中性转化酶(S-NI)活性检测试剂盒

产品价格: ¥660.00

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全国
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长期有效
最后更新:
1970-01-01 08:00:00
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产品详情

品牌名称:

土壤中性转化酶(S-NI)活性检测试剂盒

 产品内容:

提取液:液体50mL×1瓶,4保存;

试剂一:液体60mL×1瓶,4保存;

试剂二:粉剂×1瓶,4保存;临用前加入30mL试剂一充分溶解备用;用不完的试剂4保存。

试剂三:液体35mL×1瓶,4保存。

标准品:粉剂×1支,4℃保存,10mg无水葡萄糖。临用前加入1mL蒸馏水溶解,制备10mg/mL葡萄糖标准液备用。

产品说明

蔗糖转化酶(InvertaseIvr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH,将高等植物Ivr分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。NI主要存在于细胞质中,负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。     NI催化蔗糖分解产生还原糖,进一步与3,5-二**水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在540nm有特征光吸收,在一定范围内540nm光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算NI活性。

试验中所需的仪器和试剂:

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

土壤中性转化酶(S-NI)活性检测试剂盒

操作步骤:

一、粗酶液提取:   

按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。   

二、标准曲线绘制

将标准品稀释成1.00.80.60.40.20mg/mL葡萄糖标准液,按照测定步骤分别测定1.00.80.60.40.20mg/mL葡萄糖标准液在540nm下的吸光度(A),以各浓度下吸光值减空白管(浓度为0mg/mL)的吸光度为y轴,葡萄糖浓度为x轴绘制标准曲线。

三、测定步骤及加样表:

按下表操作:

试剂名称(μL

测定管

对照管

标准管

样本

200

200

-

试剂一

-

800

-

试剂二

800

-

800

标准液

-

-

200

混匀,37℃准确水浴30min后,煮沸10min左右(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变),12000 g4℃离心5min,取上清。

试剂三

500

500

500

混匀,煮沸10min左右(盖紧,以防止水分流失),流水冷却后充分混匀,540nm处蒸馏水调零,记录各管吸光值AΔA=A测定-A对照。

四、注意事项:

1如果加入试剂三,煮沸10min后有混浊物出现,建议离心除去沉淀后,取上清测定吸光度

2如果吸光值大于1,可以用蒸馏水将样本稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数)

土壤中性转化酶(S-NI)活性检测试剂盒

五、N I  活性计算:

标准条件下测定的回归方程为y=kx+bx为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

1、 按蛋白浓度计算

单位定义:37mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

NI活性(U/mg prot=(x×V1×1000)÷(V1×Cpr)÷T=33.3 ×x÷Cpr

2、 按鲜重计算

单位定义:37g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

NI活性(U/g=(x×V1×1000)÷(W×V1÷V2)÷T=33.3 ×x÷W

10001 mg/mL =1000μg/mL V1:加入反应体系中样本体积,0.2mLV2:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本鲜重,gT:反应时间:30min

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