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Alkaline Phosphatase Activity Detec
土壤中性磷酸酶测定试剂盒 微量法
湖南长沙供应五水偏硅酸钠
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琼脂糖凝胶6FF 索莱宝产品内容：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体30mL×1瓶，4℃避光保存，变成蓝绿色不能使用。
标准品：液体1mL×1支，1μmol/mL酚标准液，4℃保存。
产品说明：
ACP在酸性条件下催化***酸单酯水解称无机***酸，常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。
在酸性环境中，ACP催化***酸***二钠水解生成***酚，***酚与4-氨基安替和铁*化钾反应生成红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算ACP活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、 粗酶液提取：
称取约0.1g组织，加提取液1mL充分研磨，4℃、10000rpm离心10min，取上清液待测。血液可直接用于测定，如果浓度高的话，用提取液稀释。
二、 测定操作：
1.分光光度计预热30 min以上，调节波长到510 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂一置于37℃水浴中预热30 min以上。
试剂名称（μL）
测定管
对照管
空白管
标准管
蒸馏水
-
-
20
-
1μmol/mL标准品
-
-
-
20
上清液
20
-
-
-
试剂一
40
40
40
40
试剂二
40
40
40
40
混匀后置于37℃水浴中保温15min
试剂三
120
120
120
120
上清液
-
20
-
-
混匀后于510 nm测定吸光度，分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。
三、ACP活性计算：
1.按蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μmol酚。
ACP(U/mg pr)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(Cpr×V样)÷T
=0.033×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr
2.按样本鲜重计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生1 μmol酚。
ACP活力(U/g)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样] ÷(W÷V提取×V样)÷T
=0.033×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3.血液中ACP活性计算
活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚。
ACP活力(U)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样] ÷V样÷T
=0.033×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
C标准品：0.5μmol/mL； V样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.1mL；V样总：1mL；T：反应时间（min），15 min；V提取：加入提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g。
注意事项：
1、试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。
2、试剂三变蓝绿色后不能再使用。
3、加入试剂三后必须立即混匀，否则显色不完全。
4、ACP不稳定，尤其在37℃和pH大于7的条件下活力丧失快，因此酸性***酸酶样品一般需当天准备；血清样品中，每毫升血清中加入10mg柠檬酸氢二钠或者5mg硫酸氢钠，使pH降至6.5以下，或5ml血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。
