高保真DNA聚合酶

 Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA Polymerase
Hieff CanaceTM 高保真DNA聚合酶
 
产品信息
    
  
   
产品名称
   
产品编号
   
规格
   
储存
   
价格(元)
     
  
   
Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA   Polymerase
   
10135ES10
   
10 U
   
-20oC
   
96.00
     
  
   
Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA   Polymerase
   
10135ES60
   
100 U
   
-20oC
   
626.00
     
  
   
Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA   Polymerase
   
10135ES76
   
500 U
   
-20oC
   
2356.00
     
  
   
Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA   Polymerase
   
10135ES80
   
1000 U
   
-20oC
   
4256.00
     
 
  
 产品描述
Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性，保真性。耐热温度达到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了独特的延伸因子，扩增速度达到15 sec/kb。本产品配备了优化后的酶缓冲液，添加了PCR增强组分，使得该酶具有极强的扩增效率和广泛的模板适应性，非常适合复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
 
产品组分
编号
组分
产品编码/规格
10135ES10
（10 U）
10135ES60
（100 U）
10135ES76
（500 U）
10135ES80
（1000 U）
10135-A
Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA Polymerase（2 U/μL）
5 μL
50 μL
250 μL
2×250 μL
10135-B
2×CanaceTM PCR buffer (含Mg2+,dNTPs)
300 μL
3×1 mL
15×1 mL
30×1 mL
产品应用
基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃, 30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和1 μg λDNA -HindIII，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μL体系中，加入2 U本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
运输与保存方法
冰袋运输。-20oC保存。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
PCR反应体系（推荐冰上配制）
组分
体积
终浓度
ddH2O
to 50 μL
-
2×CanaceTM PCR buffer (含Mg2+,dNTPs)
25 μL
1×
DNA模板 
适量
 
Primer正向 (10 μM)
2.5 μL
0.5 μM
Primer反向 (10 μM)
2.5 μL
0.5 μM
Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL)
0.5 μL
1 U/50 μL
【注】： 1) 试剂使用：使用前要充分融化混匀。
2) 聚合酶浓度：推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化，请勿超过2 U/50 μL。
3) 聚合酶添加：为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
4）Mg2+终浓度：体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。
5）高GC模板：在体系中加入终浓度为3 %的DMSO可能有利于扩增。
6) 不同模板的推, 荐使用量（50 μL反应体系）：
模板种类
扩增片段1 kb-20 kb
基因组DNA
50 ng-200 ng
质粒或病毒DNA
10 pg-20 ng
cDNA
1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10)
PCR扩增程序
循环步骤
温度
时间
循环数
预变性
98℃
0.5-3 min
1
变性
98℃
10 sec
30-35
退火
60℃
20 sec
延伸
72℃
15-30 sec/kb
终延伸
72℃
5 min
1
【注】：1) 预变性温度和时间：推荐使用98℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。
2) 退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3) 延伸温度和时间：推荐使用72℃。延伸时间推荐如下：质粒DNA等简单模板为15 sec/kb；cDNA、基因组DNA等复杂模板为30 sec/kb，根据实际情况可延长至40 sec/kb。
4) 扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端，产物直接用于克隆，请使用平末端连接载体。