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Picogreen dsDNA Quantitation Reagent 双链DNA(dsDNA)定量试剂

产品价格: ¥515.00

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暂无
所在地区:
中国上海
有效期至:
长期有效
最后更新:
2020-10-14 02:00:01
浏览次数:
66

产品详情

品牌名称:

Picogreen dsDNA Quantitation Reagent

双链DNAdsDNA)定量试剂

产品信息

产品名称          

产品编号

规格

储存

价格(元)

Picogreen dsDNA Quantitation Reagent 双链DNAdsDNA)定量试剂

12641ES01

1Kit (100 μL)

4℃避光

515.00

12641ES02

1Kit (5×100 μL)

4℃避光

2115.00

12641ES03

1Kit (10×100 μL)

4℃避光

3845.00

12641ES04

1Kit (1×1 mL)

4℃避光

3765.00

产品描述

Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料,常用于双链DNA的定量检测。历来DNA浓度的测定在cDNA文库的构建,DNA亚克隆、PCR产物的估测等领域中具有重要意义。疫苗等生物制品中残留微量DNA的检测更是直接关系到人类的健康。

常用的检测核酸的方法有:1)紫外吸光法(A260),该法操作简便,但DNA样品中核苷酸、单链DNARNA和蛋白质对紫外吸收信号影响很大,还容易受到核酸样品中污染物的干扰,不能区分DNARNA,而且灵敏度低(ΔA260=0.1相当于5 ug/mLdsDNA);2)探针杂交法,该法是传统检测微量DNA的常用方法,基本能满足目前疫苗和治疗性生物制品的检测需求,但是该法耗时较长,操作繁琐,稳定性、敏感性和特异性较差;3Hoechst33258染料法,Hoechst33258是一种一定程度上特异于双链DNA的核酸染料,基本不受蛋白质的干扰,可以检测低至10 ng/mLDNA;在检测稳定性和灵敏度上仍达不到理想效果。

Picogreen dsDNA定量法:Picogreen仅在与DNA双链结合后才发出荧光,且所产生的荧光与DNA浓度呈正比,在存在ssDNARNA和单体核苷酸的条件下,可以选择性地检测低至25 pg/mLdsDNA。该分析在三个数量级范围内呈线性,且几乎无序列依赖性,可以精确地测量多个来源的DNA,包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNAPCR扩增产物。

相比传统的方法,Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势:灵敏度高:数量级较UV吸光读数更敏感,可节省宝贵的样品;特异性强:在等摩尔的RNA存在的条件下,对dsDNA具有特异性;耐受性好:耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖,可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA易于使用——只需在样品中加入染料,等待5分钟,然后读数即可,且适用于96384孔板;与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。适用范围广:可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。

若每次分析体积为2 mL1mL Picogreen定量试剂够200次分析使用,若使用微孔板或96孔板检测,每次使用量200 μL,则够2000次分析。

运输和保存方法

室温运输。4℃避光干燥保存,有效期6个月。

注意事项

1Picogreen定量试剂含有DMSO(已知有毒试剂),请小心操作;

2)尽管目前尚未有数据表明Picogreen具有诱变性和毒性,但是该试剂能结合双链DNA,请操作时务必小心;

3)为了您的健康,实验操作时请穿实验服和戴一次性手套。

应用实例

【注】:本方法参照2010《中国药典》进行操作。

1、染料工作液的配置

PicoGreen dsDNA定量试剂取出后回温至室温,该试剂是以100 μL 200×的浓缩液形式保存于无水DMSO中的。实验当天,根据实验用量用1×TE10mM Tris-HCl1 mM EDTApH7.5)按1:200的比例稀释PicoGreen浓缩液。如,要准备足够的操作溶液测定20个样品,可在19.9 mL1×TE 中加入100 μL PicoGreen dsDNA 定量试剂。

【注】:1)由于试剂容易吸附到玻璃表面,要在塑料容器中配制。

2PicoGreen试剂见光易降解,所以应将配好的溶液用铝箔包住或放置暗处避光保存。

3)溶液最好在配制好数小时内使用,以保证最佳结果。

2、标准品工作液的配制

小牛胸腺嘧***DNA干粉(Sigma货号:D4522-1MG1mgTrisNaCl等浓度已成标准体系),加入1mL无菌去离子水(无Dnase),配制成1 mg∕mL的标准品工作液。

【注】:标准品也可用λDNA或其他已知浓度的纯化DNA

3、标准品工作液稀释

1母液稀释:取10 μL1 mg∕mL)标准品工作液加入到990μL TE溶液中,浓度稀释成10 μg∕mL,取10 μL10μg∕mL)标准品工作液加入到990 μL TE溶液中,浓度稀释成100 ng∕mL

2倍比稀释:取800 μL100 ng∕mL)的标准品工作液加入到200μL TE溶液中,浓度达到80 ng∕mL,取500 μL80ng∕mL)的标准品工作液加入到500 μL TE溶液中,浓度稀释到40 ng∕mL;依次倍比稀释,配成20ng/mL10 ng/mL5.0 ng/mL2.5ng/mL1.25 ng/mL0.625 ng/mL的标准品溶液;

3标准曲线的制备:倍比稀释后的各梯度标准品溶液和染料工作液各取100μL混匀,避光室温放置5 min。使用FB-15型便携式荧光仪检测样品的荧光值:将混合后的溶液加入微量比色皿,确信不要在样品中引入气泡,轻轻地弹微量检测皿的外部,可以驱散气泡。以1×TE缓冲液为blank,测定样品和空白对照的荧光值;用标准品溶液的浓度(ng/mL)对应的荧光强度作直线回归,制备标准曲线。

4测量剩余样品的荧光值。荧光计将给出一个直接的浓度读数,数据可以用来产生DNA浓度的标准曲线。

4、结果分析

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