RT 007AMV逆转录酶

介   绍    RT007 AMV 逆转录酶分离自禽类成髓细胞瘤病毒 (AMV) ，其方法由 Houts 等人的方法改进而来。分离得到的酶是分子量为 157KD 的 αβ 全酶。本酶经高度纯化，完全无核酸酶污染。本酶可用于 cDNA 合成，也可用于 RNA 和 DNA 的双脱氧测序。 RT007 AMV 逆转录酶以总 RNA 或 polyA+ RNA 为模板，具有以 RNA 为模板的 DNA 聚合酶活性， DNA 为模板的 DNA 聚合酶活性和 RNase H 酶活性，最适反应温度在 42 -55 ℃ ，最高可达 60 ℃ ，如果使用焦***酸钠，最适温度为 37 -41 ℃ 。专利配方的 RT 反应缓冲液根据不同用途可以作为 5X 或 10X 反应液使用（详见标准使用方法），同时可抑制 RNase H 酶活性。按照标准使用方法可以得到长至 10-12kb cDNA 。 RT007 AMV 逆转录酶比普通 AMV 逆转录酶和 MMLV 逆转录酶能耐受更高的温度和合成更长的 cDNA 。AMV 逆转录酶与 MMLV 逆转录酶比较

特   点1. 高灵敏度 2. 高得率 3. 高达 60 ℃ 的反应温度可有效打开 RNA 二级结构 4. 可合成长至 10-12kb 的 cDNA 5. 专利配方 RT 反应液可适用不同用途

应   用① 1 μg Hela total RNA 在 42 ℃ ， 50 ℃ ， 55 ℃ ， 60 ℃ 经 RT007 AMV 酶逆转录后进行 PCR 的产物电泳结果② 1 μg Hela total RNA 经 RT007 AMV 酶逆转录后扩增不同长度 PCR 产物的电泳结果， AMV 酶可以转录长至 9.6kb 的 mRNA

③ 1 μg Hela total RNA 经以下各种逆转录酶逆转录后 ( 按照各自 Protocol) 进行 PCR 的产物电泳结果④ 1 μg Hela total RNA 经以下各种逆转录酶逆转录后 ( 按照各自 Protocol) 进行荧光 PCR （ SYBR Green I ）的结果，以下数值是 Ct 值

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参考文献1.Houts, G.E., Miyagi, M., Ellis, C., Beard, D., and Beard, J.W. (1979) J.Virol. 29(2):517-522.2.Guide to Molecular Cloning Techniques. Methods in Enzymology, Volume 152. pp 316-325. Edited by Shelby Berger and Alan R. Kimmel. Academic Press, Inc.3.Divergent expression of alpha1-protease inhibitor genes in mouse and human. Nucleic Acids Res. 1998, 26: 3794-3799.4.Bulged residues promote the progression of a loop–loop interaction to a stable and inhibitory antisense–target RNA complex. Nucleic Acids Res.2001, 29: 3145-3153.5.HIV-1 induces phenotypic and functional perturbations of B cells in chronically infected individuals. PNAS 2001, 98:10362-10367.6.Characterization of expression, and cloning, of ?-D-xylosidase and α-L-arabinofuranosidase in developing and ripening tomato ( Lycopersicon esculentum Mill.) fruit. J. Exp. Bot.2003, 54:2615-2622.7.Secondary structure models of the 3 untranslated regions of diverse R2 RNAs . RNA 2004, 10:978-987.8.Rapid Diagnostic Method for Detection of Mumps Virus Genome by Loop-Mediated Isothermal Amplification. J. Clin. Microbiol. 2005, 43: 1625-1631.9.Polymerization and RNase H activities of the reverse transcriptases from avian myeloblastosis, human immunodeficiency, and Moloney murine leukemia viruses are functionally uncoupled. J Biol Chem. 1991; 266(12):7423-31.10.Enzymatic activities associated with avian and murine retroviral DNA polymerases. Catalysis of and active site involvement in pyrophosphate exchange and pyrophosphorolysis reactions. J Biol Chem. 1980; 255(5):2000-4