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TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒AP显色系统

产品价格: ¥500.00

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全国
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长期有效
最后更新:
2021-03-27 01:30:01
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1282

产品详情

品牌名称:

TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒

AP检测系統)

一、             概述

TUNEL技术是分子生物学与形态学相结合的研究方法,对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确的反映细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征,其灵敏度远比一般的组织化学和生物化学测定法要高,因而在细胞凋亡的研究中已被广泛采用。本试剂盒适用于组织样本(石蜡或冰冻切片)和细胞样本(细胞爬片)的凋亡原位检测。

产品名称

显色系统

产品编号

TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒

AP显色系统

TUNEL-A1

二、试剂盒组成

组分

10 assays

蛋白酶K溶液

400μl

阻断剂

400μl

标记溶液

180μl

脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT

20μl

封闭液

400μl

AP-SP

400μl

20XSSC

10ml

三、自备试剂及用品

a)         淋洗缓冲液(鼎国生物:PBS***酸盐缓冲液系列BF-0011/0012/0013/0014

b)        复染剂(鼎国生物:AR-0711/0712/0721/0722/0771/0772

c)         封片剂(鼎国生物:AR-0811

d)        孵育盒(鼎国生物:AR-0951/0952

e)         定时器(鼎国生物:AR-0961/0962

f)         显微镜

g)        BCIP/NBT显色剂(鼎国生物:AR-0631/0632/0633

h)        核固红(鼎国生物:AR-0771/0772

四、不同类型标本的处理方法:

实验用玻片:清洗干净,用多聚赖氨酸或APES进行防脱处理。

细胞爬片

固定液:4% 多聚甲醛(pH7.4 PBS溶液配制)室温固定30min0.01M PBS3次,5min/

渗透液:0.1% Triton X-100溶于1XSSC溶液)冰浴2-10min

石蜡组织切片

二甲***和梯度乙醇100%95%75%50%,常规脱蜡入水。

1020ug/ml K 37  530min(可根据标本新旧厚薄调整消化时间)。

冰冻组织切片

固定液:4% 多聚甲醛(pH7.4 PBS溶液配制)室温固定30min0.01M PBS3次,5min/

渗透液:0.1% Triton X-100溶于1XSSC溶液)冰浴2-10min

五、标本处理后的操作

1.  0.01M PBS2×5min,除去PBS液,加入阻断剂,暗盒中室温孵育10min

2.  0.01M PBS2×5min

3.  制备TUNEL反应混合液:处理组用TdT酶和标记溶液体积比19混合;阴性对照不加酶,以去离子水代替。

4.  除去PBS液,加TUNEL反应混合液于标本上,暗盒中37孵育1-2h

5.  浸入2XSSC15min终止反应。

6.  0.01M PBS5min,除去PBS液,滴加封闭液,37孵育10min。不洗,弃封闭液。

7.  滴加AP-SP37孵育30min

8.  0.01M PBS3×5min,除去PBS液,每片滴加50μl BCIP/NBT显色工作液,置于避光湿盒中显5-30min。显微镜下观察无背景出现可继续显色。

9.  BCIP/NBT 染色后,自来水冲洗,核固红复染。

10. 复染后,蒸馏水洗,脱水,透明,封片。

结果观察:显微镜下观察细胞核有蓝紫色或蓝黑色颗粒者为阳性。

六、保存和有效期:

   -20保存, 1年有效。

为了您的安全和健康,请穿戴实验服和手套操作!

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