求助怎么设计mirna引物及探针...
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求助怎么设计mirna引物及探针
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- 1楼云峰_w
- 2017-02-16 00:00
miRNA引物设计（茎环法+染料法检测）
设计方法：通用茎环后端加miRNA后面6个碱基的反向互补序列为反转录引物，正向引物为miRNA去除后面6个碱基的序列，反向引物在茎环上。
反转录茎环通用序列：
GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGAC
miRNA序列：
>mmu-miR-99b-5p
MIMAT0000132 Mus musculus miR-99b-5p
CACCCGUAGAACCGACCUUGCG
mmu-miR-99b-5p反转录颈环引物为：
GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACCGCAAG
定量PCR反向引物为：TGTCGTGGAGTCGGC
正向引物为：CACCCGTAGAACCGAC
设计方法：通用茎环后端加miRNA后面6个碱基的反向互补序列为反转录引物，正向引物为miRNA去除后面6个碱基的序列，反向引物在茎环上。
反转录茎环通用序列：
GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGAC
miRNA序列：
>mmu-miR-99b-5p
MIMAT0000132 Mus musculus miR-99b-5p
CACCCGUAGAACCGACCUUGCG
mmu-miR-99b-5p反转录颈环引物为：
GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACCGCAAG
定量PCR反向引物为：TGTCGTGGAGTCGGC
正向引物为：CACCCGTAGAACCGAC