非洲猪瘟病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒_技术交流_仪器仪表技术文献

提供者:15453838811  发布时间:2018/12/11  阅读次数:53次  

非洲猪瘟病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒(A盒)

【产品名称】非洲猪瘟病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒

【包装规格】25T/盒&50T/盒

【预期用途】

本产品适合于从血清、血浆、牛奶、体液、培养液、组织匀浆液、拭子等样品中提取病毒RNA或DNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术,提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提,也无需进行耗时的醇类沉淀。获得的DNA/RNA可直接用于RT-PCRPCRNorthern杂交、以及各种病毒检测等。

【主要组成成份】

组成

25T/

50T/

纯化柱

25个

50

2ml收集管

25个

50

蛋白酶KB盒)

600µl

1.2ml

裂解液(Buffer AL

10ml

20 ml

洗涤液(Buffer RW

50ml

100ml

Nuclease Free Water

5ml

10 ml

【储存条件及有效期】

本产品部分组份(不含蛋白酶K)保存室温(15-25),有效期12个月长期保存时需置于2-8蛋白酶K保存于-20,有效期12个月。

【注意事项】

1、自备无水乙醇(96-100%)、自备离心管;

2、为避免其他核酸的污染,必须使用不含DNARNA的离心管、吸管、枪头、试剂和手套,操作人员须戴口罩;

3、避免反复冻融蛋白酶K会影响其活性。

【操作步骤】

1.转移20µl蛋白酶K1.5ml离心管中。

2.转移200 µl样品,如血清、血浆、尿液、培养液上清、或其它无细胞体液至装有蛋白酶K的离心管中,震荡混匀5s。若样品不足200µl,用Buffer PBS或无核酶水补足。(咽/口腔拭子,或固体组织样品先用Buffer PBS浸泡或匀浆后,离心取上清进行操作。)

3.加入200µl裂解液至步骤2的混合液中,涡旋混匀15s,室温静置10min

4.加入250µl无水乙醇至步骤3的混合液中,涡旋混匀15s,室温静置3min

5.纯化柱装在2ml收集管中,转移步骤4的混合液至纯化柱中。12,000rpm离心1min。

6.倒弃滤液把纯化柱装回收集管中,加入650 µl洗涤液至纯化柱中,12,000rpm离心1min。

7.按照步骤6重复一次。

8.倒弃滤液把纯化柱套回收集管,12,000rpm离心空柱2min甩干纯化柱。

9.将纯化柱转移至新的1.5ml离心管,加入50µlNuclease Free Water至纯化柱的膜中央,室温静置1min12,000rpm离心1min。离心管中即为所提取的样品DNA/RNA

非洲猪瘟病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒【常见问题

1.纯化柱堵塞

l样品用量太多:处理动物抗凝血液时,样品量控制在100-150µl。尽量使用无细胞的样品,如血浆、血清、组织匀浆液的上清等。

l蛋白酶K活性下降:重新制备蛋白酶 K。使用后蛋白酶 K必须保存于-20℃,避免反复冻融。蛋白酶 K与裂解液不能预先混合。

l样品含固体颗粒:在第4步加入乙醇前,12,000rpm离心3min去除未消化的杂质,转移上清液至新的离心管后再加入乙醇。

l样品裂解不充分:样品与裂解液混匀不充分。重新提取,加入裂解液后先颠倒混匀3-5次,然后以最高速度涡旋让样品与裂解液充分混匀。

2.下游应用结果不理想

l样品被反复解冻:避免反复冻溶样品。推荐使用新鲜样品或只解冻过一次的样品。

l蛋白酶K活性下降:更换蛋白酶K。使用后蛋白酶 K必须立即保存于-20℃,避免反复冻融。

lNuclease Free Water被污染:更换新的Nuclease Free Water或DEPC处理水。

l乙醇残留:柱子在洗脱前,需要空甩去除乙醇。对于敏感的应用,柱子在洗脱后,打开柱子的盖子,放置10-15min让乙醇彻底挥发。

l洗脱效率:处理富含DNA的样品时,把Nuclease Free Water预热至55℃后再进行洗脱,有利于提高DNA得率。

​非洲猪瘟病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒

优质商品

动物步态分析系统
动物步态分析系统
网站首页 | 关于我们 | 联系方式 | 使用协议 | 版权隐私 | 网站地图  |  排名推广  |  广告服务  |  积分换礼  |  网站留言  |  RSS订阅  |  违规举报
 
免责声明:本站有部分内容来自互联网,如无意中侵犯了某个媒体 、公司 、企业或个人等的知识产权,请来电或致函告之,本网站将在规定时间内给予删除等相关处理。