提供商: | 嘉美实验 |
服务名称: | 细胞生物学:滑膜细胞原代培养实验服务 |
实验技术原理:将人滑膜从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置α-MEM生长培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。
实验操作流程:
1、将切下的组织在手术台上请护士将标本放入低温生理盐水中(静止),在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室。
2、在超净台中将标本放入培养皿中,加入α-MEM洗涤。
3、获得组织切开,仔细辨认于关节反折处及增生的白色光滑的滑膜组织,附于关节软骨面的增生的血管翳也为滑膜组织(可作另一管消化),仔细剔除脂肪组织,用α-MEM洗二次(以去除红细胞),放在小青瓶中用解剖剪锐性切碎。
4、用双倍获得组织的体积含有4 mg/mlⅠ型胶原酶的α-MEM消化37℃孵育120分钟(在此期间震动混匀数次)。
5、30分钟后收集第一管细胞:细胞悬液经70 μm细胞滤网过滤,用1500-2000转离心6分钟,上清为Ⅰ型胶原酶加入未过滤网的组织,继续用于消化。
6、离心管底细胞用α-MEM离心洗涤2次,每次用α-MEM重悬浮后用1500-2000转,离心6分钟,最后一次用记数板观察到有细胞。细胞最终悬浮于含有10%胎牛血清的α-MEM中,接种到培养瓶中培养。
7、 60钟后收集第二管细胞:细胞悬液经70 μm细胞滤网过滤,用1500-2000 rpm离心6分钟;用α-MEM洗2次,每次用α-MEM重悬浮后用1500-2000 rpm离心6分钟,最后一次用记数板观察细胞并计数。细胞最终悬浮于α-MEM含有10%胎牛血清中,接种到培养瓶中培养。
8、必要时可做第三管细胞收集;并立即作原代滑膜细胞培养。
9、每2-3天换液一次。
实验注意事项:
客户提供:
细胞建模的药品或试剂,细胞(可代购)
交付标准:
1、细胞
2、完整项目报告(材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果)
其他:
1、全培用α-MEM或RPMI1640或DMEM,加10%胎牛血清。不能用小牛血清,胎牛血清用国产即可;
2、必须用Ca2+-free的PBS。
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