病理学服务：透射电镜（TEM)实验服务

实验技术简介：透射电镜，即透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM），通常称作电子显微镜或电镜（EM），是使用最为广泛的一类电镜。结构的研究从尺度方面可以分为宏观研究和微观研究， 而生命科学的研究主要集中在微观方面，从个体水平到分子水平的研究分辨率在0.2mm以上可以用用肉眼观察，分辨率在0.2mm-0.2um之间可以用光 镜观察，分辨率在0.2um-0.2nm之间就一定要用电子显微镜（简称电镜）技术，而细胞内部结构及相关细胞器多数在0.2um-0.2nm之间，所以 这个尺度又称为亚细胞结构，而细胞结构的变化主要表现在亚细胞水平，这种变化与之对应的功能变化也最敏感，所以生命科学的很多问题都集中在这个尺度范围 内，那么电镜就成为这个尺度研究的主要工具。

实验技术原理：由照明部分提供的有一定孔径角和强度的电子束平行地投影到处于物 镜物平面处的样品上，通过样品和物镜的电子束在物镜后焦面上形成衍射振幅极大值，即第一幅衍射谱。这些衍射束在物镜的象平面上相互干涉形成第一幅反映试样 为微区特征的电子图象。通过聚焦（调节物镜激磁电流），使物镜的象平面与中间镜的物平面相一致，中间镜的象平面与投影镜的物平面相一致，投影镜的象平面与 荧光屏相一致，这样在荧光屏上就察观到一幅经物镜、中间镜和投影镜放大后有一定衬度和放大倍数的电子图象。由于试样各微区的厚度、原子序数、晶体结构或晶 体取向不同，通过试样和物镜的电子束强度产生差异，因而在荧光屏上显现出由暗亮差别所反映出的试样微区特征的显微电子图象。

实验操作流程：

1、取材：组织块小于1立方毫米

2、固定

3、脱水

4、包埋

5、超薄切片机切片70nm

6、3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色

7、透射电镜观察，拍片

实验注意事项：
客户提供：
1、组织样品：新鲜组织放入液氮或-80度保存，组织不少于100mg；

2、培养细胞：通过细胞计数取不少于2×10⁶个细胞于EP管，加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，混匀后保存于冰箱（-80℃，避免反复冻融）；

3、血液细胞标本：以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，保存（-80℃可长期保存，避免反复冻融）；

4、血清或细胞培养液标本：离心去掉杂质后取上清入EP管，保存（4℃可保存15-20天，-80℃可长期保存，避免反复冻融）；

5、样本运输：可选择以下任何一种方式寄送标本

组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后，加冰袋寄送；

细胞样本也可直接寄送培养瓶（密封保证不污染、培养液不漏出）；

血清或上清液直接加冰袋寄送（送视路程远近2-3天可到达）。

交付标准：

1、扫描照片、读片分析

2、完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）

其他：

1、组织从生物活体取下来以后，需要立即处理，否则由于细胞内部的各种酶的作用，出现细胞自溶现象，还有可能被污染，所以必须做到快，小，准，冷（0-4摄氏度）。

2、超薄切片的切片面积最大不能超过0.5mm×0.3mm，比较难切的植物样品要求切片面积更小。