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病理学服务:碱性磷酸酶染色实验服务

产品价格: ¥2000.00

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发货时限:
暂无
所在地区:
中国湖南长沙市
有效期至:
长期有效
最后更新:
2020-06-07 02:00:02
浏览次数:
31

产品详情

品牌名称:
提供商: 嘉美实验
服务名称: 病理学服务:碱性磷酸酶染色实验服务


实验技术简介:碱性磷酸酶(AKP)的显示方法最早由Gomeri(1939) 提出,现在这种方法称为Gomeri法。碱性磷酸酶是指磷酸单酯酶Ⅰ,它能在pH8.6~10.0的最适条件下分解磷酸单酯,对于与磷酸相接的醇基没有特 异性,Gomeri法是让该酶在碱性条件下,分解甘油磷酸钠,产生磷酸根。

 

实验技术原理:在一定条件下,使细胞中的酶作用于酶的底物,使其产物在原地进行 捕捉、沉淀转化为有色产物。细胞组织中的碱性磷酸酶在碱性(PH9.0-9.6)环境下使作用液中的底物(a一磷酸萘酚钠)水解,产生出a萘酚,然后再与 偶氮盐偶联,生成不溶性的耐晒染料(最终产物的颜色因所用偶氮盐的品种不同而有所不同)。

 

实验操作流程:
1、取材、 固定、包埋、切片;
2、取已粘好烘 干的切片两块,放入二甲苯(一)→二甲苯(二)(各3-4分钟)的染缸中进行脱蜡,再经100%乙醇(一)→100%乙醇(二)→95%乙醇→90%乙醇 →70%乙醇→30%乙醇→水。每级各一分钟,在移切片时,用镊子夹住切片震荡并提起,放下反复几次,在移入下一染缸边缘前稍停留,让溶液滴净后,再入下 一染缸,以免把上一染缸溶液过多带入下一染缸,而影响切片质量;
3、将其中一块切片以蜡笔作一标记(用作对照组切片),放入沸水中煮沸5分钟;
4、将两块切片均放入AKP作用液中孵育30-60分钟,作用液要事先预热到37°C,水浴中进行;
5、取出切片在蒸馏水中洗涤;
6、放入硝酸钴溶液2-3分钟;
7、蒸馏水冲洗干净,否则切片易被污染,影响定位;
8、切片浸入硫化铵中2-3分钟;
9、蒸馏水冲洗干净;
10、经各级酒精脱水。即30%乙醇→70%乙醇→90%乙醇→950%乙醇→100%乙醇(二)→100%乙醇(一),各级一分钟。
在显微镜下观察,细胞中有黑色沉淀存在的地方,就表明有酶的存在。煮沸的对照切片无黑色沉淀。

 

实验注意事项:
客户提供:

1、组织样品:新鲜组织放入液氮或-80度保存,组织不少于100mg;
2、培养细胞:通过细胞计数取不少于2×106个细胞于EP管,加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,混匀后保存于冰箱(-80℃,避免反复冻融);
3、血液细胞标本:以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,保存(-80℃可长期保存,避免反复冻融);
4、血清或细胞培养液标本:离心去掉杂质后取上清入EP管,保存(4℃可保存15-20天,-80℃可长期保存,避免反复冻融);
5、石蜡切片,冰冻切片以及细胞爬片,涂片等。
6、样本运输:可选择以下任何一种方式寄送标本
组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后,加冰袋寄送;
细胞样本也可直接寄送培养瓶(密封保证不污染、培养液不漏出);
血清或上清液直接加冰袋寄送(送视路程远近2-3天可到达)。

交付标准:
1、图片;
2、完整项目报告(材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果)。

其他:
1、色时间根据具体情况分析,在显微镜下观察,从几十秒到几分钟不等,主要是估计颜色不再加深。
2、取材要新鲜,以免降低血管内皮碱性磷酸酶的活性。


Tel:010-57425721/57425722  Fax:010-80780672   
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