病理学服务：细胞 Hochest 凋亡染色实验服务

实验技术简介：Hoechst染料都可在350nm左右的紫外光激发。都在461nm处发出蓝靛色荧光光。Hoechst染色时无需用DAB来显色，它直接结合细胞的DNA ，经过紫外光激发后发出蓝色荧光。

实验技术原理：Hoechst是可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较 低。 荧光染料Hoechst能少许进入正常细胞膜，使其染上低蓝色，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst比正常细胞的多，荧光强度 要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体DNA的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不 能有效地将Hoechst排出到细胞外使之在细胞内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。

实验操作流程：
1、可贴壁细胞生长于含有盖玻片的培养皿中,或将非贴壁细胞悬浮培养；
2、将HOECHST加入培养皿,终浓度为10ug/ml,37℃孵育30min；
3、加入4%PF,与培养液1:3混合,固定细胞5-10min；
4、固定后将长有细胞的盖玻片用封片剂封于载玻片；
5、荧光显微镜下观察。

实验注意事项：
客户提供：
1、组织样品：新鲜组织放入液氮或-80度保存，组织不少于100mg；
2、培养细胞：通过细胞计数取不少于2×10⁶个细胞于EP管，加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，混匀后保存于冰箱（-80℃，避免反复冻融）；
3、血液细胞标本：以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，保存（-80℃可长期保存，避免反复冻融）；
4、血清或细胞培养液标本：离心去掉杂质后取上清入EP管，保存（4℃可保存15-20天，-80℃可长期保存，避免反复冻融）；
5、石蜡切片，冰冻切片以及细胞爬片，涂片等。
6、样本运输：可选择以下任何一种方式寄送标本
组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后，加冰袋寄送；
细胞样本也可直接寄送培养瓶（密封保证不污染、培养液不漏出）；
血清或上清液直接加冰袋寄送（送视路程远近2-3天可到达）。
交付标准：
1、图片；
2、完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）。
其他：
1、Hoechst能与DNA结合，干扰DNA复制和细胞分裂，因此有致畸和致癌危险。使用和废弃需谨慎。
2、对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。
3、荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。


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