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免疫学外包实验:流式CBA多因子检测外包实验

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2020-07-15 02:00:02
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品牌名称:
提供商: 嘉美生物
服务名称: 流式CBA多因子检测外包实验
【嘉美实验】虽然液相蛋白定量检测的技术很多,但是大多数的技术仅能对样本进行单一指标的检测,同时检测多个指标时则需要提供大量的样本分批检测,操作繁琐,且各指标间差异性较大。对于样本量较少或需要对比各指标的用户,传统的技术无法满足需要。日常实验中,常需对溶液体系中的可溶性蛋白进行定量检测,如细胞培养上清或血清中的细胞因子含量的定量分析,由于这些因子的含量较少,低于一般常规方法的检测下限,使用常规的蛋白检测方法Western Blot等很难检测。为此,著名的流式抗体公司BD-Pharmingen开发了基于流式细胞仪的液相蛋白定量技术——CBA。嘉美生物是该技术在国内最早的推广者,并同时为广大生命科学研究者提供流式CBA的检测外包服务。

CBA工作原理:Cytometric Bead Array(CBA),即细胞因子微球检测技术。是一种基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法,它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。BD公司利用流式细胞仪可对荧光信号进行级数放大的特性,将受检的可溶性因子附着于一些具有近似细胞直径的微粒上,即可对受检样品中的各种可溶性因子进行检测。 CBA的基本原理近似于ELISA的检测,即利用微小、分散的颗粒捕获液体待测物,并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒——待测物复合体所散发的荧光,从而测定待测物的数量。

流式CBA多因子检测外包实验

详细原理介绍:每个CBA微球大小一致,具有特定的荧光强度,包被有适用于特定分析(如其它抗体或者可溶性蛋白)的特异性捕获抗体(Capture Antibody),提供了类似ELISA孔板的捕获表面。当微球和待测样品溶液混合后,微球上的特异性抗体就与样品(血清、血浆或者细胞培养液)中相应的抗原或蛋白结合,然后加入荧光标记的检测抗体,就会形成“三明治”夹心复合物。最后通过流式细胞仪对特异性目的蛋白进行检测。CBA的每种微球携带有不同强度的红色荧光,在流式细胞仪的FL3通道通过检测微球荧光强度的差异对目的蛋白定性;检测抗体带有PE荧光素标记,在流式细胞仪的FL2通道检测,通过检测抗体的PE荧光强度定量目的蛋白。
 
流式CBA多因子检测外包实验

CBA技术特点:CBA是集ELISA和细胞流式技术优点为一身的液相蛋白检测技术。CBA的每一种微球提供一种蛋白的捕获表面,捕获微球与待测样品后,呈悬浮态,与ELISA相比,能更有效地捕获被分析物;CBA具有FCM的宽范围荧光检测特点,对样本需求量更少,检测更快速、更准确。下面我们介绍一下CBA主要的技术特点:
1、轻松实现多重检测。最多可同时对一个样本中的75个目的蛋白进行精确定量。
2、样本需要量小。仅需要50μL溶液就可进行一次检测。
3、更高的灵敏度。分析灵敏度高达2.8pg/mL。
4、更高的灵敏度、更宽的检测范围和更好的重复性。CBA技术使蛋白定量的分析灵敏度高达pg/ml级别,检测范围达0-5000pg/ml,所有分析只需一组标准曲线。根据抗体的荧光强度对目的蛋白定量,排除了ELISA反应中酶联放大产生的假阳性。
5、检测对象的灵活组合—BD CBA Flex Set。CBA kit是同时检测试剂盒配好的6个指标,形式比较固定。为满足不同客户的实际需要和研究兴趣,BD于2005年初推出了CBA Flex set。它改变了CBAkit的固定形式,成为自由组合、灵活搭配的“自助餐”。您可以根据需要组合不同的捕获微球来检测多个指标,最多能同时检测75个指标。除了拥有CBA kit的优势外,Flex Set还配有独立的软件分析系统(CBA Flex Set Analysis Software),并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上,直接用96孔和384孔板进行操作。CBA Flex set赋予研究者更灵活、更自由,更大的选择空间,而且进一步丰富了CBA产品线。种类涉及免疫、细胞信号传导、细胞凋亡等许多领域的蛋白定量分析。
6、操作简单,省时省力。CBA技术采用芯片式集成测定,所有检测只需一组标准曲线,就可计算出每种待测蛋白浓度;操作简单,整个流程只需要3.5小时,对待测样本可做实时分析,缩短检测了时间,提高了检测效率。
7、强大的软件分析系统。BD CBA软件具有强大的数据处理能力,直接将目标蛋白的检测结果换算成标准浓度;除了为用户提供待测物的计数结果外,还能提供可视轮廓或信号图形以帮助用户获得更多的信息。有用于Macintosh和Microsoft系统两种版本供您选择。和传统的液相蛋白定量技术相比,CBA技术是一种“多元”和“同步”的检测技术。革新的CBA技术与传统的蛋白定量相比有下列优点:
 
传统ELISA 流式CBA检测技术
单项检测 多参数检测
每项实验样本用量50-200ul 样本用量少于50ul
需要抗原包被 操作方便,节省时间
实验时间大于24h 流式细胞仪自动检测,标准曲线自动测定,专用软件自动计算
酶-底物背景干扰 无酶-底物背景干扰

 
流式CBA多因子检测外包实验

CBA应用:自CBA上市以来,越来越多的科研和临床研究人员将CBA应用于他们的领域。CBA应用领域涉及眼泪、血清、唾液、细胞培养上清等样本中细胞因子、炎症因子的水平的分析。CBA还用于细胞信号传导中磷酸化蛋白、凋亡相关蛋白分析,系统性红斑狼疮(SLE)和新生儿脓血症等免疫疾病的监控,肿瘤研究,药物对病人的治疗效果评估,药物研发,疫苗研究,总体免疫功能分析等多领域。

CBA指标检测明细:
1、CBA指标
 
 目录号  产品说明  检测指标
 557800  Non-human Primate Th1/Th2 Cytokine Kit  IL-2, IL-4, IL-5, IL-6,TNF, IFN-γ
 560485  Mouse Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit  IL-2, IL-4, IL-6, IFN-γ, TNF, IL-17A, IL-10
 551287  Mouse Th1/Th2 Cytokine Kit  IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ,TNF
 552364  Mouse Inflammation Kit  IL-6, IL-10, MCP-1, IFN-γ, TNF, IL-12p70
 550026  Mouse Immunoglobulin Isotyping Kit  Heavy and light chain isotypes of mouse IgG1,  
 IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM, and IgE
 560484  Human Th1/Th2/Th17 Kit  IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-γ, IL-17A
 550749  Human Th1/Th2 Cytokine Kit  IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF, IFN-g
 551809  Human Th1/Th2 Cytokine Kit II  IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-g
 551811  Human Inflammatory Cytokine Kit  IL-8, IL-1β, IL-6, IL-10, TNF, IL-12p70
 552990  Human Chemokine Kit  IL-8, RANTES, MIG, MCP-1, IP-10
 561418  Human Anaphylatoxin Kit  C3A,C4A,C5A


2、CBA Flex Set 细胞因子检测指标
 
 Human  Mouse  Rat
 IFN-γ,INF-α
 IL-1 α ,IL-1β,   
 IL-2,IL-3,
 IL-4 , IL-5, IL-6, IL-7,
 IL-8, IL-9, IL-10,   
 IL-11,IL-12, IL-12p70, 
 IL-13,IL-17A, IL-21, 
 IL-23p40
 TNF,TNFRⅠ,TNFRⅡ
 IP-10
 I-TAC
 MIG
 MCP-1
 MIP-1 α, MIP-1 β
 Eotaxin
 RANTES
 CD54(ICAM-1)
 CD62E,CD62P,CD62L
 CD106(VCAM-1)
 sCD40
 sCD154
 sCD121a,sCD121b
 Soluble CD14
 Basic FGF
 VEGF
 Angiogenin
 G-CSF,GM-CSF
 LIF
 LT-α
 OSM
 Granzyme A, 
 Granzyme B
 Fas Ligand(FasL)
 Fractalkine
 IgA, IgG1, IgG2,  
 IgG3,IgG4, IgM, 
  Total IgG,
 IFN- γ
 IL-1 α ,IL-1β, IL-2,IL-3,
 IL-4 , IL-5, IL-6, IL-9,
 IL-10, IL-12, IL-12p70,
 IL-13, IL-17A, IL-21, 
 IL-23p40,
 TNF
 MIG
 MCP-1
 MIP-1 α, MIP-1 β
 RANTES
 KC
 CD62E(E-Selectin),
 CD62L(L-Selectin)
 G-CSF,GM-CSF
 IFN- γ
 IL-1 α, IL-4 , IL-6,
 IL-10
 TNF

 
3、CBA Flex Set 信号转导指标
 
 Phospho Akt1(S473)  Phospho Akt2(S474)
 Phospho BLNK (Y84)  Phospho p120 Catenin(Y228)
 Phospho Btk (Y551)  Phospho MEK1/2(S222)
 Phospho eNOS (S1177)  Phospho Paxillin(Y118)
 Phospho ERK1/2 (T202/Y204)  Phospho Pyk2(Y402)
 Phospho Itk (Y511)  Phospho SLP-76(Y145)
 Phospho JNK1/2 (T183/Y185)  Phospho c-jun(S63)
 Phospho p38 (T180/Y182)  Phospho stat3
 Phospho PLCg (Y783)  Total Stat1
 Phospho Rsk (T573)  Total Syk
 Phospho Stat1 (Y701)  Total ZAP70
 Phospho Syk (Y352)  Phospho ZAP70 (Y319)

 
4、CBA Flex Set 干细胞指标
 
 Human Rex-1 Flex Set  Human Nanog Flex Set
 Human Oct-4 Flex Set  

 Tel:010-57425721/57425722  Fax:010-80780672   
E-mail:lab-manager@jiamay.com
Web:www.jiamay.com.cn         www.jiamay.com
400免费热线:400-0007-401
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