蛋白质组学：多肽合成与修饰技术服务

实验技术简介：多肽合成是一个固相合成顺序一般从C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来，经过不断的改进 和完善，到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术，表现出了经典液相合成法无法比拟的优点，从而大大的减轻了每步产品提纯的难度。多肽合成总 的来说分成两种：固相合成和液相多肽合成。

实验技术原理：
多肽合成仪以固相合成为反应原理，在密闭的防爆玻璃反应 器中使氨基酸按照已知顺序（序列，一般从C端-羧基端 向 N端-氨基端）不断添加、反应、合成，操作最终得到多肽载体。固相合成法，大大的减轻了每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧 链都是保护的。羧基端是游离的，并且在反应之前必须活化。

实验操作流程：
1、去保护：Fmoc保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂（piperidine）去除氨基的保护基团。 
2、激活和交联：下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化。活化的单体与游离的氨基反应交联，形成肽键。在此步骤使用大量的超浓度试剂驱使反应完成。循环：这两步反应反复循环直到合成完成。
3、洗脱和脱保护：多肽从柱上洗脱下来，其保护基团被一种脱保护剂（TFA） 洗脱和脱保护。

多肽修饰类型：
1、C端标记技术 ：
C端酰胺化（Amidation,C-termainal）、醛基化（Aldehydes）、醇基化（Alcohols）、pNA (p-Nitroanilide)
AMC、AFC、巯基乙胺化（Cysteamide）、酯基化（Ester）、N-烷基化（N-Alkyl Amides）等
2、N端标记技术 ：
乙酰化Acetylated （Acetylated）、Palmytolyl、HYNIC、生物素标记（Biotinylated）、Br乙酰化（Bromoacetylated）
螯合反应（DOTA，DTPA conjugated）、甲醛化（Formylated）、十四烷基、十八烷基化（Myristoylated）
琥珀酰化、棕榈酸化、苹果酸化、脂肪酸化等（Succinylated）
3、荧光标记修饰：
C端修饰:AFC, AMC, Dap(Dnp), Lys(Dye), pNA, Rh110
N端修饰:Bodipy-FL, Cy3, Cy5, Texas Red, 5-Tamra, 5-lodoacetamido fluorescein
Rhodamine 110 and Rhodamine B Luciferin, EDANS
FAM, FITC, MCA, Rox, Sulforhodamine 101, 5-TAMRA
4、环化反应：
首尾成环，中间成环，特殊成环（N -> C or Head to Tail）
2对二硫键，3对二硫键（Disulfide (S-S bond formation) .Trisulfide formation）
天然产物活性肽成环（Cyclic-natural peptides ）
5、甲基化修饰：
侧链甲基化Lys(For),Lys(Me), Lys(Me)2, Lys(Me)3, Arg(Me)2 symmetrical, D-Tyr(Me),D-Tyr(Et)
N端甲基化（N-Me-Arg,N-Me-Asp, N-Me-Glu, N-Me-Leu, N-Me-Nle, N-Me-Nva, N-Me-Phe, N-Me-S N- Me-Ser, N-Me-Trp, N-Me-Thr, N-Me-Val）
6、几种特殊修饰：
各 种偶联（BSA, KLH conjugated peptides for antibody production ）、磷酸化（Phosphoserine, Phosphothreonine, Phosphotyrosine）、磺化（Sulfated Tyrosine or Serine）、MAPS (Multiple Antigenic Peptide)、糖肽（Glycopeptides）、 PEG修饰（PEGylation）

实验注意事项：
客户提供：
1、多肽序列、数量、纯度及特殊要求
2、冻干多肽可在-20度保存或室温保存
3、溶液肽远比冻干形式不稳定，溶液应为中性PH（5-7）-20度保存。
4、为避免样品的反复冻融，最好分成小样存放。
交付标准：
合成多肽、数据
其他：
大多数多肽的首选溶剂是超纯抽气水，稀乙酸或氨水分别对碱性或酸性多肽的溶解也有帮助。如果这些方法用过后还不溶解的多肽，建议用DMF，脲，guanidiniam,chloride,acetonitnle来溶解。

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