测序类服务：microRNA 测序技术服务

实验技术简介：microRNA是一类大 小为21-23nt的非编码小RNA分子，通过沉默或降解其靶点mRNA分子调控基因表达。大量研究表明，microRNA在正常发育过程以及疾病发生过 程中具有重要的作用，在诊断和治疗领域具有光明的应用前景。然而目前研究microRNA的方法主要是通过实时定量PCR以及基因芯片技术，这些方法主要 关注microRNA的表达与定量，并仅局限于研究那些序列信息或二级茎环结构信息已知的microRNA，无法寻找和发现新的microRNA分子。

基于Illumina高通量测序平台的microRNA测序技术突破了目前研究技术手段上的局限性，不但可以检测 microRNA表达差异，而且可以研究 microRNA的3’异质性，众多的isomiR（microRNA异构体），以及未发现的新的microRNA，为更加灵活、深入研究 microRNA提供解决方案。

实验操作流程：
1、样品RNA准备
2、测序文库构建
   PAGE胶纯化特定大小的microRNA分子
    连接5’RNA接头
    连接3’RNA接头
    逆转录反应获得cDNA测序文库
    高保真聚合酶扩增构建的测序文库
3、DNA成簇（Cluster）扩增
4、高通量测序（Illumina Genome Analyzer IIx）
5、数据分析
    原始数据读取
    使用公用microRNA数据库注释已知microRNA
    深层次数据分析
6、提供实验报告
    原始数据报告（Fasta-Q格式），包含所有测序序列信息，碱基读取质量评估
    基本数据分析报告（Excel表格），包含有效序列的序列信息、与参考基因组比对后的注释信息等
    高级数据分析（应客户要求定制），如使用已知数据库注释已知microRNA及分析不同样本间表达水平差异，使用已知数据库鉴别rRNA，tRNA，snRNA，snoRNA并预测新的microRNA，预测microRNA的靶点基因。

实验注意事项：
客户提供：
1、样品量：细胞样品请提供至少5×10⁶个细胞，组织样品请提供至少100mg的组织块或切片。DNA样品请提供2μg以上的基因组DNA。
2、样品质量：DNA无明显降解，OD260/280值在1.7～1.9之间，浓度≥ 50ng/μl。
3、样品保存：细胞样品或新鲜组织块（切成～50mg的小块）用液氮速冻后，-80℃保存。DNA样品可溶于的超纯水或TE（PH8.0）中，-20℃短期保存或者-80℃长期保存。样品保存期间避免反复冻融。
4、样品运输：细胞或组织样品置于1.5 ml管中，封口膜封好，干冰运输。DNA样本放离心管或者PCR板中，密封后，冰袋运输。
5、目的基因或转录因子的相关背景资料。
交付标准：
1、提供实验报告原始数据报告Fasta-Q格式包含所有测序序列信息碱基
2、读取质量评估基本数据分析报告Excel表格包含有效序列的序列信息、与参考基因组比对后的注释信息等。

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