酶活性检测：自由基检测实验服务

实验技术简介：自由基，化学上也称为“游离基”，是指化合物的分子在光热等外界条件下，共价键发生均裂而形成的具有不成对电子的原子或基团。（共价键不均匀裂解时，两原子间的共用电子对完全转移到其中的一个原子上，其结果是形成了带正电和带负电的离子，这种断裂方式称之为键的异裂。）

实验技术原理：

电子顺磁共振（EPR）：

电子顺磁共振（EPR）或称电子自旋共振（ESR）现象最早发现于1944年。它利用具有未成对电子的物质在磁场作用下吸收电磁波的能量使电子发生能级间的跃迁的特征，对顺磁性物质进行检测与分析。

自旋捕集方法是将不饱和的抗磁性化合物（自旋捕集剂）加入反应体系,与反应体系中产生的各种活性高、寿命短的自由基结合形成相对稳定的自旋加合物,以适于ESR检测 。

其原理是利用适当的自旋捕捉剂与活泼的短寿命自由基结合,生成相对稳定的自旋加合物,可以用电子自旋共振波谱法检测自旋加合物的数量,利用自旋加合物的数量来计算原来自由基的多少。

分光光度法：

是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的一项技术

化学发光法（CL）:

化学发光的原理是发光剂被自由基氧化成激发态，反应物或产物分子从中获得能量的电子激发， 形成电子激发态 , 当返回基态时 , 以发射光子的形式释放能量 , 这一过程称为化学发光(CL)

荧光探针法 :

荧光探针法测定技术的核心是荧光探针 , 探针本身应该没有荧光或只有很弱的荧光 , 能很容易通过细胞膜 , 但在细胞或细胞器内被自由基氧化后发出较强的荧光。

HPLC法:

HPLC法测定需要先用捕捉剂捕获自由基，捕捉剂应能与自由基反应形成稳定的结合物，且易于分离与检测。一般 的·OH捕捉剂是安息香酸/水杨酸(SA)、苯二甲酸、二甲亚砜(DMSO)等。·OH与二甲基亚砜反应生成甲磺酸,可以通过HPLC来测定其含量,从而 推测·OH的含量。

电位滴定法：

电位滴定法与直接电位法的不同在于，它是以测量滴定过程中指示电极的电极电位（或电池电动势）的变化为基础的一类滴 定分析方法。滴定过程中，随着滴定剂的加入，发生化学反应，待测离子或与之有关的离子活度（浓度）发生变化，指示电极的电极电位（或电池电动势）也随着发 生变化，在化学计量点附近，电位（或电动势）发生突跃，由此确定滴定的终点。

极谱法：

极化电极（滴汞电极）通常和极化电压负端相连，参比电极（甘汞电极）和极化电压正端相连。当施加于两电极上的外加直 流电压达到足以使被测电活性物质在滴汞电极上还原的分解电压之前，通过电解池的电流一直很小（此微小电流称为残余电流），达到分解电压时，被测物质开始在 滴汞电极上还原，产生极谱电流，此后极谱电流随外加电压增高而急剧增大，并逐渐达到极限值（极限电流），不再随外加电压增高而增大。这样得到的电流-电压 曲线，称为极谱波。极谱波的半波电位E1/2是被测物质的特征值，可用来进行定性分析。扩散电流依赖于被测物质从溶液本体向滴汞电极表面扩散的速度，其大 小由溶液中被测物质的浓度决定，据此可进行定量分析。

实验注意事项：

客户提供：
1、组织样品：新鲜组织放入液氮或-80度保存，组织不少于100mg；

2、培养细胞：通过细胞计数取不少于2×10⁶个细胞于EP管，加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，混匀后保存于冰箱（-80℃，避免反复冻融）；

3、血液细胞标本：以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，保存（-80℃可长期保存，避免反复冻融）；

4、血清或细胞培养液标本：离心去掉杂质后取上清入EP管，保存（4℃可保存15-20天，-80℃可长期保存，避免反复冻融）；

5、样本运输：可选择以下任何一种方式寄送标本

组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后，加冰袋寄送；

细胞样本也可直接寄送培养瓶（密封保证不污染、培养液不漏出）；

血清或上清液直接加冰袋寄送（送视路程远近2-3天可到达）。

交付标准：

1、图片