货号: | ALX-350-268-MC01 |
保质期: | 1年 |
英文名: | Phalloidin (FITC) |
数量: | 大量 |
供应商: | Enzo (Alexis/Biomol/Assay Designs) |
规格: | 0.1 mg |
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 生产商 |
Phalloidin (FITC) | ALX-350-268-MC01 | 0.1 mg | Enzo (Alexis/Biomol/Assay Designs) |
贮存液配制
0.1mg FITC-Phalloidin 溶于0.5ml 无水甲醇 (或DMSO),配成200 μg/ml 贮存液。分装冻存于-20oC,干燥、避光保存至少一年。
染色方法
1. 细胞爬片生长24-48 小时;
2. 预温PBS(37 oC)清洗细胞2 次,每次10 分钟;
3. 4%多聚甲醛室温固定5-10 分钟,PBS 清洗细胞3 次;
【备注】也可用3.7%的甲醛溶液固定,但甲醛中不能含有甲醇,因为在固定过程中甲醇可能会破坏肌动蛋白。
4. 0.1%Triton X-100/PBS 室温破膜3-5 分钟,PBS 清洗细胞3 次;
【备注】该步骤可以省略,因为Phalloidin 分子量很小,多聚甲醛固定后细胞膜产生的孔洞足以让Phalloidin 进入细胞。且经Triton 破膜后,Phalloidin 可能对细胞核有非特异性染色。
5. 5 μl FITC-Phalloidin 贮存液加入150 ul PBS 中配成工作液 (5 μg/ml )并用以染细胞,室温染色30-60 分钟;1) FITC-Phalloidin 工作浓度范围为2-50 μg/ml,一般使用浓度为5 μg/ml;2) 为降低非特异性染色,配制FITC-Phalloidin 工作液时,可在PBS 中加入1% BSA(牛血清白蛋白)。或者在染FITC-Phalloidin 前用含1% BSA 的PBS 液室温封闭细胞20-30分钟。 3)为防止染色过程中液体的蒸发,最好在密闭的湿盒内进行。
6. PBS 清洗细胞3 次;
7. 吸去多余水分,加荧光封片液(中性或偏碱性缓冲液加等量甘油)封片,荧光或共聚焦显微镜下观察。
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嘉美生物是一家主要从事Annexin V,信号转导抗体,重组人和动物蛋白,磷酸化抗体,各种动物ELISA试剂盒,生物实验服务等研发与销售的高科技生物公司,免费热线:400-698-4168。 业务咨询 QQ :1213084081
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