淋巴细胞培养基

 一、规格：24瓶/盒
二、培养基组成成份：
RPMI1640、血清、肝素、PHA等。
三、使用方法：                                                       
在酒精灯旁直接把采集到的外周血0.2—0.4mL接种到每瓶培养基内，注意摇匀，置37℃培养68或69小时，用7^#针头每瓶加2—3滴秋水仙素（20微克/毫升）摇匀，继续培养3小时左右，即可制片。
四、操作程序：
1．采血：用10:2肝素（10％）温润无菌注射器抽取外周血2ml（注意：消毒时需脱碘）。
2．种血：将注射器搓捏，使血样混匀，在无菌条件下，用7^#针头垂直种血28-32滴（一般成年男子28滴，成年女子30滴，儿童32滴左右）至外周血培养基内。
3．培养：将培养瓶放入37℃恒温箱中培养68-72小时，培养期间注意观察培养液有无凝血、溶血或长菌的现象，可每天将培养液摇一摇，以便细胞可获得充分的营养，一般情况下可不摇。
4．制片：
   加秋：在培养完成前2-3小时，加入浓度为20ug/ml的秋水仙素2-3小滴（7^#针头竖滴）后，继续培养2-3小时。
   离心：将培养液用吸管吸至离心管中（10ml离心管）2000转/分×10分钟，弃上清,留沉淀。
   低渗：加入已预温至37℃的0.075mol/L 氯hua钾溶液约8ml，用吸管充分打匀，放入37℃水浴箱中，温育30分钟。
   预固定：向离心管中加入现配的预温至37℃的甲醇、冰醋酸固定液（3:1）1ml左右，轻轻混匀，
置室温下5分钟，2000转/分×10分钟，弃上清,留沉淀。
固定：沿管壁缓慢加入现配的预温至37℃的新配固定液约8ml，轻轻混匀，然后2000转/分离心10分钟。加入固定液再次固定。
弃上清，用固定液将沉淀调成细胞悬液（不宜太浓，一般加固定液至0.5ml）在冰片上滴片，每张片上滴2滴。
烤片：立即放入75℃烤箱中烤片3小时。
5．显带：先将玻片放在预温至37℃的0.25％胰酶溶液中（PH＝7.2-7.4）消化1分左右，每次作用时间并不完全相同。可先试一张片子，再根据显带效果调整胰酶作用时间，再放在预温至37℃的0.75％Nacl溶液中漂洗两次，在预温至37℃的Giemsa溶液中染色10分钟，自来水冲洗干净，用吹风机吹干后，即可阅片。
五、保质期限：在-20℃条件下，8个月
六、配制日期：见瓶上标签
七、注意事项：
1、采集的外周血若立即接种则无需加肝素抗凝，如需保存标本，应加肝素抗凝。
2、采集的外周血在冰箱4℃保存，保存期不能超过一周。