Vita-Blue细胞活性检测试剂（类似AlamarBlue） 

实验数据

价格对比

产品描述

Biotool Vita-Blue细胞活性检测试剂是一种氧化还原反应的指示剂，利用活细胞中的脱氢酶使发弱蓝色荧光的底物刃天青还原成发强粉红色荧光的物质试卤灵（图1），而且试卤灵的产量与活细胞的数量呈线性关系（图2），可以在荧光显微镜下观察，也可以利用荧光计读取相对荧光值。该机制类似于MTT与WST-8等四唑盐利用比色法测细胞活性的机制。Biotool Vita-Blue细胞活性检测试剂为一瓶即开即用的溶液，该试剂安全，无放射性，性价比高，为客户提供方便、快速、可靠的使用体验。

图形1: Viable cells convert blue and lowly fluorescent Resazurin into pink and highly fluorescent product Resorufin with Biotool Vita-Blue Cell Viability Reagent.

图形2: Cell number determination using Biotool Vita-Blue Cell Viability Reagent. Serial 3-fold dilutions of HL60 cells were prepared at 100 μl/well in a 96-well plate and cultured for 6 hours at 37°C. Biotool Vita-Blue Cell Viability Reagent (10μl/well) was added and cells were incubated for 4 hour before recording fluorescence (560Ex/590Em) using the Envision 2104 microplate reader.

实验方法

实验流程简图

需要的但不包括在该试剂盒中的实验器材

• 荧光计数器（激发光530-570 nm，发射光590-620 nm）
• 多道移液器
• 3 % SDS（可选）

准备细胞

对于贴壁细胞，接种于培养瓶后使之贴壁并生长4–24小时，然后开始检测。对于悬浮细胞，接种与培养瓶后可以立即检测或24小时之内检测。一般地，103-106个细胞足够一次检测。

实验操作

1. 在细胞培养液中直接加入1/10体积的Biotool Vita-Blue细胞活性检测试剂，充分混合，保证孔中蓝色均一性，但避免气泡产生。对96孔板，每100µl培养液加入10µl活性检测试剂。
2. 培养细胞1-4小时，但需避免直接暴露在光线中。
说明：检测的灵敏性随培养时间的延长而提高。对于数量较少的细胞，可以培养24小时后检测。
3. 当培养液颜色由纯蓝变为淡粉红色时，使用荧光计数器（激发光530-570 nm，发射光590-620 nm）记录荧光读数。由于该实验是活细胞实验，应该选取多个时间点以确定最佳的结果。但是当蓝色完全消失时表明培养时间过长，应当避免。
说明：使用Biotool Vita-Blue细胞活性检测试剂时会在590nm处有轻微的自发荧光。这种荧光背景随培养基、pH值、培养时间、暴露于光线的时间等因素的变化而变化。为了纠正背景，准备一个或多个无细胞的对照孔，计算其平均的荧光值，然后从试验孔中扣除该值。
4. 可选步骤：在100μl细胞中加入10 μl 3% SDS 以终止反应，可在3天内读取荧光值。

预防措施

1. 使用前请充分混匀，避免反复冻融。
2. 微生物污染或还原剂在存在会减少刃天青向试卤灵的反应，产生假阳性。
3. 确保包含合适的对照，包括阳性、阴性与无细胞对照。

储存条件

Biotool Vita-Blue细胞活性检测试剂在避光条件下可在室温保存6个月，2-8°C保存一年，-20°C及以下可保存更长时间。