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大鼠源rno-miR-15b* Stem-loop sybr g
mmu-miR-219a-2-3p 检测引物
通过认证 
R428 (BGB324)
Protease Inhibitor C| 货号： | B40015a |
| 保存条件： | 零下20摄氏度低温保存 |
| 供应商： | Biotool |
| 数量： | 大量现货 |
| 英文名： | Mouse Direct PCR Kit |
| 规格： | 500 rxns |
Mouse Direct PCR Kit
Quick & Easy, Cost-effective, Reliable Results
产品简介
本试剂盒专为小鼠快速基因型鉴定（Genotyping）而研制。试剂盒中包含的高效组织消化液（Protease Plus）能够迅速从小鼠尾巴、耳朵或脚趾等组织中释放足量的基因组DNA，并且无需对其进行抽提与纯化，可直接将消化产物作为模板加入抗干扰型2 x M-PCR OPTITM Mix中进行PCR扩增，PCR扩增产物（含有染料）可直接点样进行电泳观察。实验操作简便而省时。
应用范围
小鼠基因型鉴定（尾巴、耳朵或脚趾）
小鼠基因组DNA扩增、测序
产品组成
| B40013 (200 rxns) | B40015 (500 rxns) | B40018 (2000 rxns) | |
|---|---|---|---|
| Buffer L (mL) | 20 | 50 | 200 |
| Protease Plus (mL) | 0.4 | 1 | 4 |
| 2 x M-PCR OPTI™ Mix (mL) | 2 | 5 | 20 |
| User Guide | Yes | Yes | Yes |
储存条件
Buffer L 4℃保存，其余组分-20℃保存。保质期一年。
操作步骤
1. 组织消化
1.1. 按小鼠数量配制组织消化液，试剂比例如下：
| （单样本） | |
|---|---|
| Protease Plus | 2 μL |
| Buffer L | 100 μL |
组织消化液现用现配，充分混匀后使用。
1.2. 向每个含有样本的EP管中加入100 μL新鲜组织消化液，55℃水浴/金属浴中消化30 min。组织消化时，务必将组织完全浸没于消化液中。消 化完成后，组织外观上仍然完整，但足量的基因组DNA已经释放，不影响后续的PCR实验。
1.3. 将样本置于95℃水浴/金属浴中孵育5 min以灭活消化液中的蛋白酶活性。消化后的上清或连同组织的消化液可于-20℃保存三个月。
2. PCR扩增
2.1. PCR反应体系：
反应体系的配制最好于低温环境下（如冰浴）完成，以保证PCR扩增效率和扩增特异性。
| PCR 反应组分 | 20 μL 反应体系 (μL) | 50 μL 反应体系 (μL) |
|---|---|---|
| ddH2O | 7 | 18 |
| 正向引物 (10 μM) | 0.5 | 1 |
| 反向引物 (10 μM) | 0.5 | 1 |
| 模板（消化产物） | 2 | 5 |
| 2 x M-PCR OPTI™ Mix | 10 | 25 |
2.2. PCR反应条件：
| 温度 (℃) | 时间 | 循环数 |
|---|---|---|
| 94 | 5 min | 1 |
| 94 | 20 sec | 30-40 |
| 50-65 | 30 sec | |
| 72 | X min (2kb/min) | |
| 72 | 5 min | 1 |
| 12 | -- | 1 |
PCR产物的3’端带有碱基A，可直接克隆至T载体，用于DNA测序。
3. 琼脂糖凝胶电泳
试剂2 x M-PCR OPTITM Mix中含有溴酚蓝染料，PCR产物可直接点样进行琼脂糖凝胶电泳。
常见问题与对策
| 常见问题 | 可能原因 | 对策 |
|---|---|---|
| 样本组与阳性对照组均无扩增条带 | PCR反应条件设置不当 | 优化PCR反应条件 |
| PCR引物质量问题 | 重新设计PCR引物 | |
| 样本组无扩增条带而阳性对照组正常 | 不当储存或长期储存引起试剂活性丧失 | 使用新鲜的试剂 |
| 组织消化不够充分 | 延长55℃消化时间至60 min | |
| 蛋白酶未被完全灭活 | 消化产物在95-100℃孵育5 min | |
| 存在非特异性扩增条带 | PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高 | 增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度 |
| PCR引物错配 | 重新设计PCR引物 | |
| 配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久 | PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应 |
实验数据
更多详情请访问唯一官方网站http://www.biotool.cn/product/Mouse-Direct-PCR.html 温馨提示：不可用于临床治疗。
