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Indo-1, AM,Cell Permeable 细胞可渗透钙离子荧光探针

产品价格: ¥1.00

最小起订量:暂无 可售数量:暂无

发货时限:
暂无
所在地区:
中国上海
有效期至:
长期有效
最后更新:
2020-03-31 18:01:18
浏览次数:
22
企业信息

产品详情

品牌名称:
美国ATCC
货号: YB40775ES50
生长状态: 贴壁生长
运输方式: 干冰运输
器官来源: 咨询
是否是肿瘤细胞: 咨询
细胞形态: 上皮样
免疫类型: 咨询
物种来源: 咨询
相关疾病: 咨询
组织来源: 咨询
供应商: 上海钰博
数量: 1000
Indo-1, AM,Cell Permeable 细胞可渗透钙离子荧光探针产品描述

Indo-1是一种细胞生物学常用的钙离子荧光探针,与Fura-2为目前使用最广泛的比率法测定的钙荧光指示剂,Indo-1能特异性地结合Ca2+,同时可发出荧光,结合Ca2+后的最大发射波长从结合前的475nm向400nm(Ca2+饱和时)偏移,该信号变化可被流式细胞仪较好的捕捉:在氩离子激光器的351-364光谱范围内单一波长激发该探针,在400nm和475nm的波长处分别检测结合钙离子和未结合钙离子的荧光信号,通过二者荧光强度的比率测定钙离子浓度。

由于Indo-1是极性大的酸性化合物,无法进入细胞内,为此在其负性基团上结合乙酰氧甲酯,使其成为Indo-1/AM,该变化既增加了酯溶性又消除了负电荷,极大的提高了细胞渗透性。在细胞内,Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可与胞浆游离Ca2+可逆性结合。

Indo-1, AM,Cell Permeable 细胞可渗透钙离子荧光探针产品性质

CAS号(CAS NO.)

112926-02-0

分子式(Formula)

C47H51N3O22

分子量(Molecular Weight)

1009.91

Ex/Em

346nm/475nm

溶解性(Solubility)

溶于DMSO

结构式(Structure)


运输和保存方法

冰袋运输。-20℃避光干燥保存,有效期6个月。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

需要试剂准备

1) (可选)配制Pluronic F-127母液:100mg Pluronic F-127粉末(Cat No. 60318ES60)中加入0.5ml DMSO,配制成20%(w/v)的DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存,不要冷藏。如果有结晶析出,可以重新加热后溶解,不影响使用。

2)Hanks•balanced salt solution(HBSS)

Indo-1, AM,Cell Permeable 细胞可渗透钙离子荧光探针使用方法(本实验方案仅供参考,为得到最理想实验结果,需根据具体的实验情况优化实验条件。)

1)Indo-1/AM储存液的配制

利用高质量无水DMSO溶解Indo-1/AM配制成2-5mM的储存液,该储存液可分装于-20℃避光干燥密封保存。每次使用前需回温至室温。

【注】:① 因为Indo-1/AM在水中的溶解性和稳定性较差,不可用水溶性缓冲液配制Indo-1/AM储存液。

② 溶解用的DMSO需要保证新鲜无水,否则将会导致AM 体水解,使荧光染料无法进入细胞,影响实验效果。

2)Indo-1/AM工作液的配制

利用合适缓冲液(如Hanks & Hepes )将Indo-1/AM稀释成1-10μM的工作液,具体稀释方法如1 mM母液配制1 ml浓度为4 µM工作液,用1 ml 缓冲液稀释4 µl 1mM母液即可,混匀。

【注】:① 典型工作液浓度为0.1-5μM,对于大多数细胞,我们推荐加载浓度4-5μM,具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性,建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

② Indo-1/AM工作液需现配现用,避免反复冻存。

3)(可选)如果Indo-1/AM进入细胞的效果不好,可向 Indo-1/AM/DMSO 储存液中加入适量20% Pluronic F127溶液,最终稀释至其终浓度为0.02-0.05%,Pluronic F127 可以防止 Indo-1/AM在缓冲液中聚合并能帮助其进入细胞。

【注】:Pluronic F127可降低Indo-1/AM的稳定性,因此只建议在配制工作液时加入,不建议将其加入储存液长期保存。

4)取出预培养的细胞,除去培养基,使用缓冲液洗涤细胞3次。

【注】:如果使用含血清的培养基,血清中的酯酶会分解 AM 体,从而降低Indo-1/AM进入细胞的效果。另外含有酚红的培养基会使本底值略微偏高,所以加工作液之前需尽量去除培养基残留。

5)将 Indo-1/AM工作液加入细胞,加入量以覆盖细胞为准。在37℃培养15-60min,然后除去Indo-1/AM工作液。

【注】:关于孵育的时间,如果首次做实验不能确定,建议先孵育30min,看荧光效果:如果细胞死亡较多,适当缩短时间;如果荧光强度太弱,适当延长时间。

6)用不含探针缓冲液洗涤细胞 3 次,以充分去除残留的Indo-1/AM工作液。然后加入缓冲液覆盖细胞。

7)37℃培养箱孵育约 20-30min,以确保 AM 体在细胞内的完全去酯化作用。

8)流式细胞仪检测细胞。

【注】:① 某些细胞会将荧光探针被动运输或分泌到胞外,在一些通过阴离子泵泄漏探针的细胞内该现象尤其严重,此时需加入一些抑制剂防止该情况的发生,如加入适量的丙磺舒或磺吡酮。但需注意,抑制剂的加入量必须经过优化,过量的抑制剂也会对细胞造成不利影响。

② 某些细胞具有自体荧光会影响结果分析,需使用未加载探针细胞做对照,在结果分析时在同一波长下扣除自荧光。

Indo-1, AM,Cell Permeable 细胞可渗透钙离子荧光探针SF-9    昆虫细胞系    品牌ATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
L8824    草鱼肝脏细胞    品牌ATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
CIK    草鱼肾脏细胞    品牌ATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
WCF    团头鲂尾鳍细胞    品牌ATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
SCF    白鲢尾鳍细胞    品牌ATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
SiHa    人宫颈鳞状细胞癌    品牌ATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
Ski    人宫颈上皮细胞癌    品牌ATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
SW626    人卵巢腺癌细胞    品牌ATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
BI U-87    膀胱癌细胞    品牌ATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
C6/36    蚊子细胞    品牌ATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
ybZY-1    大鼠肾小球系膜细胞    品牌ATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
AN3 CA    人子宫内膜腺癌细胞    品牌ATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
H4    人脑神经胶质瘤细胞    品牌ATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
HEC-1-B    人子宫膜腺癌细胞    品牌ATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
MADB106    大鼠乳腺腺癌细胞系    品牌ATCC    规格25毫升/株.    货期1-2周
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yb-hxbz-002    人口腔上皮癌长春新碱耐药株    KB/V    规格25毫升/株.
yb-hxbz-003    人口腔癌细胞    HB    规格25毫升/株.
yb-hxbz-004    人喉表皮样癌细胞    HEp-2    规格25毫升/株.
yb-hxbz-005    人咽鳞癌细胞    FaDu     规格25毫升/株.
yb-hxbz-006    人喉癌细胞    TU 686    规格25毫升/株.
yb-hxbz-007    人喉癌细胞    TU212    规格25毫升/株.
yb-hxbz-008    人喉癌细胞    M2e    规格25毫升/株.
yb-hxbz-009    人喉癌细胞    M4e    规格25毫升/株.
yb-hxbz-010    人食管癌细胞    Eca-109    规格25毫升/株.
yb-hxbz-011    人食管癌细胞    EC871214    规格25毫升/株.
yb-hxbz-012    人食管癌细胞    CaEs-17    规格25毫升/株.
yb-hxbz-013    人食管癌细胞    TE-1    规格25毫升/株.
yb-hxbz-014    人食管癌细胞    TE-10    规格25毫升/株.
yb-hxbz-015    人食管癌细胞    TE-11    规格25毫升/株.
yb-hxbz-016    人食管癌细胞    EC97076    规格25毫升/株.
yb-hxbz-017    人食管鳞癌    KYSE 150    规格25毫升/株.
yb-hxbz-018    人食管鳞癌    KYSE 450    规格25毫升/株.
yb-hxbz-019    人食管鳞癌    KYSE30    规格25毫升/株.
yb-hxbz-020    人食管鳞癌    KYSE70    规格25毫升/株.
yb-hxbz-021    人食管癌细胞    KYSR450    规格25毫升/株.
yb-hxbz-022    人食管癌细胞    KYSE510    规格25毫升/株.
yb-hxbz-023    人胃癌细胞系    HS-746T    规格25毫升/株.
yb-hxbz-024    人胃癌细胞    BSG823    规格25毫升/株.
yb-hxbz-025    人胃粘膜细胞    GES-1    规格25毫升/株.
yb-hxbz-026    人胃腺癌细胞    MGC-803    规格25毫升/株.
yb-hxbz-027    人胃腺癌细胞    MCG803    规格25毫升/株.
yb-hxbz-028    人低分化胃癌细胞    BGC-823    规格25毫升/株.
yb-hxbz-029    人低分化胃癌细胞    SGC7901    规格25毫升/株.
yb-hxbz-030    人耐VCR胃腺癌细胞    SGC-7901/VCR    规格25毫升/株.
yb-hxbz-031    人低分化胃癌细胞    MKN-45    规格25毫升/株.
yb-hxbz-032    人未分化胃癌细胞    HGC-27    规格25毫升/株.
yb-hxbz-033    人胃腺癌细胞    AGS    规格25毫升/株.

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