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Lymphocyte separation medium1.084 淋巴细胞分离液1.084

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所在地区:
中国上海
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长期有效
最后更新:
2020-10-30 02:00:01
浏览次数:
20
企业信息

产品详情

品牌名称:
美国ATCC
货号: YB40504ES60
生长状态: 贴壁生长
运输方式: 干冰运输
器官来源: 咨询
是否是肿瘤细胞: 咨询
细胞形态: 上皮样
免疫类型: 咨询
物种来源: 咨询
相关疾病: 咨询
组织来源: 咨询
供应商: 上海钰博
数量: 1000
Lymphocyte separation medium1.084 淋巴细胞分离液1.084 产品描述

淋巴细胞分离液(Lymphocyte Separation Medium 1.084,简称LSM-1.084)是一种无菌的即用型分离液,基于Böyum的Ficoll-甲泛影钠溶液做过一些改良,使得操作简单快速且分离效率更高。本品是无菌的聚蔗糖Ficoll/泛影酸钠混合溶液,密度为1.084 g/ml,内毒素含量很低(<0.12 EU/ml),是在严格控制的环境下加工生产的,生产条件符合ISO13485:2003标准和GMP认证。相对于密度为1.077 g/ml的人淋巴细胞分离液,本品适用于分离更高密度的人单个核细胞,包括外周血,脐带血以及骨髓瘤来源的组织样本。还适用于分离大小鼠血细胞,正因为啮齿动物的淋巴细胞密度稍高于人淋巴细胞。

工作原理

去纤维蛋白或抗凝人血以1:1的比例用无菌生理盐水或平衡盐溶液稀释,小心的添加在分离液上层(不要混杂在一起),之后离心30-40min。离心过程中,差速迁移使其最终形成几个不同的细胞分层:

①聚集在管底的颗粒主要是Ficoll 聚集的红细胞以及沉淀物;

②紧挨着上面一层的颗粒主要是粒细胞,其处于LSM-1.084溶液的渗透压临界,具有足够高的密度迁移穿过LSM-1.084溶液层。

③单个核细胞分布在血浆和LSM-1.084分离液的中间层,还包括一些沉降系数低(密度低)的颗粒,如血小板。

淋巴细胞,单核细胞和血小板不具有足够高的密度穿透LSM-1.084分离液层,因此这些细胞在血浆和LSM-1.084分离液层聚集形成一个中间分层。吸取中间层,用平衡盐溶液短暂洗涤,以除去血小板,细胞分离介质和血浆,就可以单个核细胞。通常情况下,分离所得的细胞中95±5%为单个核细胞,细胞存活率>90%,回收率为60±20%。

Lymphocyte separation medium1.084 淋巴细胞分离液1.084运输与保存方法

室温运输。

4-30 °C密闭避光环境下可稳定保存3年。开瓶后需4-8 °C保存。

影响单个核细胞分离效果的因素

1.血液样品保存时间

血液尽可能新鲜且无血块。血液放置过久可能会降低细胞存活率、回收率,甚至有可能引入粒细胞和/或红细胞污染。

2.血液体积

血液量和管径决定样本在管子中的高度,以及后续的离心时间。提高离心管内的血液高度会引入红细胞污染的可能。但是分离效率不会明显受管径的影响。因此,对于体积大的血样,建议可在保持离心时间不变的情况下选择更大直径的离心管。

3.红细胞去除效率 

单个核细胞分离的产量和纯度与红细胞是否去除干净有关。

若全血中红细胞发生凝集会导致一些单个核细胞也被聚集在内,从而在离心后被沉降在红细胞层内。可通过稀释全血的方法来避免此现象。温度大小会影响红细胞的凝集,18℃条件能提供最佳的分离效果。若温度升高(如37℃)会提高红细胞凝集的可能,降低分离效果。低温(4℃)环境红细胞聚集可能降低,需要增加离心时间。提高离心时间到5-10min能减低红细胞污染。

4.血小板污染

对于血小板要求较为严格的分离实验,使用4-20%的蔗糖梯度层加在LSM-1.084溶液层上方,再次离心以去除所有的血小板。离心后,血小板分布在蔗糖溶液上方,单个核细胞穿过蔗糖溶液停留在LSM-1.084溶液上方。

操作方法

1.材料准备

①样本体积(4ml总体积):取2ml的去纤维蛋白或抗凝血,将其与等体积(2ml)的无菌盐溶液以1:1比例混合。注:大体积的血样可以得到相同的分离效率,只需要选用更大直径的离心管,以维持血样的高度(约3cm)和LSM-1.084溶液的高度(约2.4cm)。

②LSM-1.084分离液,使用前需放到室温环境下温度平衡10-30min;

③平衡盐溶液:用做稀释和清洗液,建议直接购买商业化的盐溶液。也可以使用其他溶液,如不含Ca2+/Mg2+的磷酸盐溶液(如DPBS溶液),Hank’s,或者细胞培养液(如RPMI 1640)。

2. 分离单个核细胞

1)取2ml的去纤维蛋白或抗凝血,将其与等体积(2ml)的无菌盐溶液以1:1比例混合,于10-15ml离心管中颠倒混匀,或用枪上下轻轻吹打数次以至混匀。

注:肝素、EDTA、柠檬酸钠、ACD、CPD抗凝皆可。去纤维蛋白血不需要抗凝剂。

2)使用前轻轻颠倒瓶子使LSM-1.084充分混合,用注射器或枪头无菌条件转移3 ml LSM到10-15 ml离心管中。 

 

3) 小心将稀释血液加入3 ml LSM-1.084(室温即可)的上层,使得在血液和LSM间形成一个明显的分层。不要将稀释血液混入LSM-1.084中,如图1;



 图1 加样后分层示意图

4)室温下400×g离心30-40min,离心可以沉淀红细胞和多形核白细胞,同时可以在LSM-1.084上形成一层单核-淋巴细胞分层,如图2所示(从上到下,依次分为血浆层-单个核细胞层-LSM-1.084层-粒细胞-红细胞);

5)用无菌枪头吸掉单个核细胞层(含淋巴细胞和单核细胞)上方2-3mm的血小板/血浆,小心操作勿吸入单个核细胞层内破坏其平衡(如图2)。

 

注:也可以不用先吸走血浆层,直接用枪吸取单个核细胞层。另外,上层血浆不含细胞,也可以留作他用




     图 2  吸除上层血浆和血小板前后分层示意图

6)用无菌枪头将单核细胞层转移入一个新的无菌离心管。

注:一定要吸取所有的单个核细胞中间层,以及少量上方的血浆液和下方的LSM-1.084分离液。

7)预估转移后的单个核细胞量,加入至少3倍体积(约6ml)的平衡盐溶液于上述离心管中。

8)使用枪头上下轻轻吹打将单层细胞溶液充分悬浮。

9)室温400-500×g离心10-15min。

注:高速离心有助于提高单个核细胞的回收率,但如果需要彻底去除血小板,则推荐低速离心(60-100×g)。

10)去除上清,加入6-8ml平衡盐溶液重悬单核细胞。

11)室温400-500×g(或者60-100×g去除血小板)离心10min。

12)去除上清,用适当培养基重悬单个核细胞备用。

6)用无菌枪头将单核细胞层转移入一个新的无菌离心管。

注:一定要吸取所有的单个核细胞中间层,以及少量上方的血浆液和下方的LSM-1.084分离液。

7)预估转移后的单个核细胞量,加入至少3倍体积(约6ml)的平衡盐溶液于上述离心管中。

8)使用枪头上下轻轻吹打将单层细胞溶液充分悬浮。

9)室温400-500×g离心10-15min。

注:高速离心有助于提高单个核细胞的回收率,但如果需要彻底去除血小板,则推荐低速离心(60-100×g)。

10)去除上清,加入6-8ml平衡盐溶液重悬单核细胞。

11)室温400-500×g(或者60-100×g去除血小板)离心10min。

12)去除上清,用适当培养基重悬单个核细胞备用。

3. 分离粒细胞

1)-6)同上方单个核细胞的分离步骤。

7)小心吸除LSM-1.084层,注意切勿吸入粒细胞层。

8)转移暴露在表面的白色粒细胞层(位于红细胞层上方)于一个无菌的50ml离心管。

9)加入至少5倍体积的平衡盐溶液重悬粒细胞,于400×g离心15min。

10)吸除上清,加入6-8ml平衡盐缓溶液重悬粒细胞,于室温400-500×g离心10min。

11)吸除上清,用适当培养液重悬粒细胞备用。

Lymphocyte separation medium1.084 淋巴细胞分离液1.084注意事项

1)稀释去纤维蛋白血液或肝素化血液用的盐溶液为无菌液体;

2)为保持淋巴细胞的活性,应该采血后尽快进行分离。分离细胞层实际上是单个核细胞层,包括淋巴细胞和单核细胞;

 

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作.
Lymphocyte separation medium1.084 淋巴细胞分离液1.084yb-axbz-167    杂交瘤细胞枝原体阳性    B6YH4    规格25毫升/株.
yb-axbz-168    鼠细胞系    B82    规格25毫升/株.
编号    中文    英文名称    规格25毫升/株.
yb-axbz-169    兔肾细胞系    RK-13    规格25毫升/株.
yb-axbz-170    猴肾细胞系    MA-104    规格25毫升/株.
yb-axbz-171    VERO衍生株    SVP    规格25毫升/株.
yb-axbz-172    猪肾细胞系    PK-15    规格25毫升/株.
yb-axbz-173    猪肾细胞系    IBRS-2    规格25毫升/株.
yb-axbz-174    草鱼肾细胞系    GIK    规格25毫升/株.
yb-axbz-175    昆虫细胞系    Sf-21    规格25毫升/株.
yb-axbz-176    昆虫细胞系    SF-9    规格25毫升/株.
yb-axbz-177    草鱼肝脏细胞    L8824    规格25毫升/株.
yb-axbz-178    草鱼肾脏细胞    CIK    规格25毫升/株.
yb-axbz-179    团头鲂尾鳍细胞    WCF    规格25毫升/株.
yb-axbz-180    白鲢尾鳍细胞    SCF    规格25毫升/株.
yb-axbz-181    散鳞镜鲤尾鳍细胞        规格25毫升/株.
yb-axbz-182    鲤鱼尾鳍细胞        规格25毫升/株.
yb-axbz-183    转化的豚鼠胎体细胞    104C1    规格25毫升/株.
yb-axbz-184    中国仓鼠肾细胞(二氢叶酸还原酶缺陷型)    CHO/dhFr-    规格25毫升/株.
yb-axbz-185    大鼠乳腺腺癌细胞系    MADB106    规格25毫升/株.
yb-axbz-186    鼠肉瘤细胞    S-180-S2D9    规格25毫升/株.
yb-axbz-187    鼠肝癌细胞    H22-H8D8    规格25毫升/株.
yb-axbz-188    鼠腹水瘤    EAC-E2G8    规格25毫升/株.
yb-axbz-189    小鼠淋巴瘤    EL-4    规格25毫升/株.
yb-axbz-190        鳞癌VX-2(兔模型)    规格25毫升/株.
yb-axbz-191    鲑鱼胚胎细胞    CHSE    规格25毫升/株.
yb-axbz-192    鲑鱼胚胎细胞    RTG    规格25毫升/株.
yb-axbz-193    大黄鱼肾细胞    PCK    规格25毫升/株.
yb-axbz-194    鼠腹水单核细胞瘤    J774A.1    规格25毫升/株.
yb-axbz-195        小鼠IL-3依赖性32D细胞    规格25毫升/株.
yb-axbz-196    大黄鱼EPC细胞    EPC    规格25毫升/株.
yb-axbz-197    菜青虫卵巢细胞    Pr-HNV8    规格25毫升/株.
yb-axbz-198    大鼠胰岛素细胞    INS-1    规格25毫升/株.
yb-axbz-199    小鼠淋巴结血管上皮样细胞    SVEC4-10    规格25毫升/株.
yb-axbz-200    小鼠肉瘤    S37    规格25毫升/株.

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