支原体检测试剂盒

一.试剂盒说明

   支原体（mycoplasma）：支原体是一种大小仅为0.2~0.3 um，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 um）的原核生物，在细胞培养过程中，支原体感染发生率达到63%，因而细胞培养过程中被支原体污染是一个世界性的难题。当细胞（特别是传代细胞）被支原体污染后，细胞内的DNA、RNA及蛋白表达发生改变，而细胞的生长率一般并未发生显著的影响，因而细胞被支原体污染一般难以察觉。因此细胞都需要定期（如每个月）进行支原体污染的检测。检测支原体的方法包括肉汤或琼脂培养、 ELISA、直接或间接的荧光染色、PCR法等，其中， PCR法灵敏度最高（可检测10个拷贝DNA）。本试剂盒能检测支原体种类包括 M. Arginini, A.laidlawii, M.Orale, M. Hyorhinis, M. Fermentans,等多种常见支原体，在细胞污染中这些种支原体占到99%以上的比例。本产品克服了PCR反应配置过程中的繁琐程序，通过加入抑制非特异性结合的cocktail，有效的整合了所有PCR反应成分，实现了一步法PCR技术新的突破。

二.试剂盒组份

三. 操作步骤

   反应体系：    Myco-PCR-Mix        18ul

                       待检测细胞上清液      2ul

  按照以上反应比例，在PCR管中将待检测样品上清液 2ul加入到18ul Myco-PCR-Mix中，每次检测请用Positivecontrol模版作为阳性对照，用Negative control模版作为阴性对照。PCR反应程序为：95℃ 5min，（95℃ 30s，55℃ 45s，72℃ 45s）36 个循环，72℃ 5min， 10℃ 保存。PCR产物跑1.5 % 琼脂胶，用DL2000的DNA Marker显示片段大小。待检测样品中如果出现与阳性对照大小一致（250 bp）的条带，说明样品被支原体感染。

四. 注意事项