【正品直销，售后保障】（一步法无缝克隆）ClonExpress® II One Step Cloning Kit

非连接依赖型的快速克隆技术

• 简单、快速、高效，适用于任何载体
• PCR产物无需酶切；不依赖于连接酶
• 有效克隆50 bp-10 kbp DNA片段
• PCR产物可不进行纯化直接克隆
• 可用于DNA高效定点突变

产品描述：
ClonExpress^TM技术是一种简单、快速并且高效的DNA定向克隆技术，可将插入片段PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点。将载体进行线性化，并在插入片段PCR引物5’端引入线性化载体的末端序列，使得PCR产物5’和3’最末端分别带有和线性化载体两末端一致的序列（15 bp～20 bp）。这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化载体按一定比例混合后，在Exnase的催化下，仅需反应30 min即可进行转化，完成定向克隆，阳性率可达95%以上。
ClonExpress^TM II是新一代的重组克隆试剂盒，包含增强的重组酶Exnase^TM II。和上一代产品相比，Exnase^TMII中添加了独特的重组增强因子。一方面，这种增强因子可以显著提高重组克隆效率，即便使用低效率感受态细胞（107 cfu/μg）也可实现高效克隆（100 cfu/ng Vector）。另一方面，Exnase^TM II还兼容常规酶切、PCR反应体系。载体的酶切或PCR产物和插入片段PCR产物可以不进行DNA纯化，直接用于重组克隆，极大的简化了实验步骤。

图1：使用ClonExpress^TM II进行基因克隆实验流程
用于重组反应的克隆载体必须为线性化载体。该线性化载体可通过内切酶消化环状载体获得，也可由反向PCR扩增环状载体获得（图，上左）。插入片段由PCR扩增制备。所用扩增引物在设计时需在其5’端添加线性化克隆载体末端序列（图中以红色和蓝色标记）。使用该引物对扩增插入片段，扩增产物5’ 和 3’ 最末端的序列分别和线性化克隆载体两末端序列完全一致（图，上右）。以线性化克隆载体和插入片段扩增产物配制重组反应体系，37℃反应30 min即可完成重组反应，实现两线状DNA的体外环化（图，中）。重组产物直接进行转化，平板上会形成数百个单克隆供后期阳性筛选（图，下）。

图2：从λDNA中扩增500 bp片段，使用ClonExpress^TM II One Step Cloning Kit克隆至pUC 19 EcoRI和HindIII位点之间。重组反应转化后平板上形成了数千个单克隆，而无插入片段的阴性对照反应转化后只有数个单克隆形成。

图3：菌落PCR鉴定重组子。重组反应转化后平板上形成了数千个单克隆中挑取24个进行菌落PCR鉴定。M：Marker III；1-24, 24个单克隆。如果菌落为自连载体转化形成，则PCR条带应为150 bp左右；如果片段成功插入载体，则PCR条带应为650 bp左右。所鉴定克隆有23个为阳性。

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