固相萃取柱 C18柱

SPE固相萃取简介
固相萃取小柱为样品分析前的储备提供快速和有效的纯化和浓缩，为使这些产品获得最佳的分析结果需要注意以下四个方面：

• 样品的物理和化学特征：影响因素如被分析物相对与介质的极性，带电荷的官能团，溶解性，分子量，等等，决定了被分析物与填充床的结合强度。
• 选择适当的保留方法：可能的方法有两种：第一，被分析物不保留与填充床，而干扰物保留，如此纯化了样品。第二，被分析物保留与填充床，而干扰物不保留，或者在样品洗脱前先从填充床上洗脱。当样品需要浓缩时，常用的方法为第二种方法。
• 选择适当的填充料和填充床大小：不同的填料类型提供不同的选择性。填料类型应最大的利用被分析物和样品中的干扰物的结构差异。选择有适当选择性的填料能获得最高的回收率和最高纯度的样品和提取物。当填充床的大小未经优化时，通常有回收率低的问题。填充床太大时会导致洗脱不完全，而填充床太小时会导致保留不完全，两种情况都是回收率比预期的低。
• 选择合适的调节，冲洗和洗脱溶剂：必须注意各类溶剂相对于填料的洗脱强度（见下图）上样的样品调节溶剂应是没有洗脱作用的“弱溶剂”，必须使用缓冲也来控制潜在的带电荷化合物的离子化程度。冲洗溶剂应将弱保留的干扰物洗脱，但是洗脱强度不应太强而导致被分析物洗脱。洗脱溶剂的强度应足够使被分析物在较小的体积下（1-2ml）完全洗脱。

化合物在溶剂中的溶解性是一个重要的参数。一种溶剂如果不溶解被分析物而溶解样品中的干扰物，那么它是一种绝佳的冲洗溶剂，但是不能作为洗脱溶剂。
      
 
 

 
C18：
反相萃取，适合于非极性到中等极性的化合物
C8：
反相萃取，适合于非极性到中等极性的化合物
C2：
相对C18和C8，因为短链，保持作用小的多，适合非极性化合物。
硅胶：
极性化合物萃取，如乙醇，醛，胺，药物，染料，除草剂，农药，酮，含氮类化合物，有机酸，苯酚，类固醇。
氨基：
正相萃取，适合于极性化合物。弱阴离子交换萃取，适合于碳水化合物，弱性阴离子和有机酸化合物。
氰基：
反相萃取，适合于中等极性的化合物，正相萃取，适合于极性化合物，比如，黄曲霉毒素，抗菌素，染料，除草剂，农药，苯酚，类固醇。弱阳离子交换萃取，适合于碳水化合物和阳离子化合物。
强阴离子交换（SAX）：
强阴离子交换萃取，适合于阴离子，有机酸，核酸，核苷酸，表面活化剂。容量：0.2毫当量/克。
强阳离子交换（SCX）：
强阳离子交换萃取，适合于阳离子，抗菌素，药物，有机碱，氨基酸，儿茶酚胺，除草剂，核酸碱，核苷，表面活化剂。容量：0.2毫当量/克。
酸性氧化铝：
极性化合物离子交换和吸附萃取，如维生素。
碱性氧化铝：
吸附萃取和阳离子交换。
中性氧化铝：
极性化合物吸附萃取。调节pH，阳和阴离子交换，适合于维生素，抗菌素，芳香油，酶，糖苷，激素。
硅酸镁：
极性化合物的吸附萃取，如乙醇，醛，胺，药物，染料，除草剂，农药，PCBs，酣，含氮类化合物，有机酸，苯酚，类固醇。

常 用 固 相 萃 取 程 序
反相填料——此类填料中包括应用最为广泛的反相填料C18。另外，C8，C2环已基和苯基键合相也有供应，并提供不同的选择性。一般来说，非极性到中等极性化合物在极性基质中保留于反相填料上。此种填料要求在使用前以有机溶剂和随后的水溶液进行平衡调节。中等极性化合物的洗脱通常采用甲醇，对于非极性的化合物的洗脱则需要极性更低的溶剂。
 
反相SPE操作步骤：
A、调节
先用3-5ml甲醇冲洗填料。再用3-5ml水或缓冲液冲洗填料。在上样前请勿让填料流干。
B、上样
将样品加到填充床的上面。将样品以1-5mL/min速度推或抽过填料。如果所需样品不被保留，请收集样品用于分析。
C、冲洗
如果所需样品被保留，使用极性溶剂将弱保留干扰物冲洗下来。
D、洗脱
使用1-2mL的非极性溶剂将所需化合物洗脱。收集样品用于分析。
 
正相填料——硅胶，Florisil，氨基，氰基，双醇基和氧化铝均有供应。正相填料保留溶于非极性介质中的极性化合物。使用非极性溶剂调节平衡，采用极性更大的溶剂洗脱。碱性化合物均保留于硅胶填料上，极性非常强的化合物（如碳水化合物）将不可逆地保留于硅胶填料。在此情况下，双醇基或氨基键合相是更好的选择。
 
正相SPE操作步骤：
A、调节
用3-5mL非极性溶剂冲洗填料。
B、上样
将样品加到填充床的上面。将样品以1-5mL/min速度推或抽过填料。如果所需样品不被保留，请收集样品用于分析。
C、冲洗
如果所需样品被保留，使用非极性溶剂将弱保留的干扰物冲洗下来。
 
 
固相萃取四步骤
                                                      
             
           
              
弃去     弃去     弃去  收集分析
 
D、洗脱
使用1-2mL的极性溶剂将所需化合物洗脱。收集样品用于分析。
 
离子交换填料——强阴离子(SAX)和强阳离子（SCX）交换基均有供应。样品中阴/阳离子分别和树脂上的阴/阳离子交换使得阴/阳离子保留于相关树脂上。洗脱采用高离子强度的缓冲液（0.1M—0.5M），或者通过改变淋洗液的pH使得样品中化合物不再带电荷。这些树脂的骨架通常为苯乙烯—二乙烯基苯共聚物，样品中有机溶剂含量的增加将会导致交换容量的降低。
 
离子交换SPE操作步骤：
A、调节
用5mL去离子水或低离子强度的缓冲溶液(0.001M—0.01M)冲洗填料。
B、上样
将样品加到填充床的上面。将样品以1—2mL/min速度推或抽过填料。如果所需样品不被保留，请收集样品用于分析。
C、冲洗
如果所需样品被保留，使用去离子水或低离子强度的缓冲溶液将弱保留的干扰物冲洗下来。
D、洗脱
使用1-5mL的高浓度的盐溶液（0.1—0.5M）将所需化合物洗脱，或改变洗脱缓冲液的pH使得样品化合物不再离子化。收集样品用于分析。

固相萃取柱的使用

温馨提示：不可用于临床治疗。