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人1,25 二羟基维生素D3(1,25 DHVD3)elisa试剂盒说明书

产品价格: ¥1150.00

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发货时限:
暂无
所在地区:
中国上海
有效期至:
长期有效
最后更新:
2020-08-01 02:00:02
浏览次数:
8

产品详情

品牌名称:
Grbio
货号: elisa试剂盒厂家
供应商: 广锐生物-国内高、优Elisa试剂盒供应商
人1,25 二羟基维生素D3(1,25 DHVD3)elisa试剂盒说明书 广锐生物-国内高、优Elisa试剂盒供应商 本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中1,25 二羟基维生素D3(1,25 DHVD3)的含量。
实验原理:
人1,25 二羟基维生素D3(1,25 DHVD3)elisa试剂盒说明书  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人1,25 二羟基维生素D3(1,25 DHVD3)水平。用纯化的人1,25 DHVD3 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入1,25DHVD3,再与HRP 标记的1,25 DHVD3 抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化
成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的1,25 DHVD3 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人1,25 DHVD3 浓度。
人1,25 二羟基维生素D3(1,25 DHVD3)elisa试剂盒说明书  试剂盒组成:
试剂盒组成48 孔配置96 孔配置保存
说明书1 份1 份
封板膜2 片(48) 2 片(96)
密封袋1 个1 个
酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存
标准品:2000pg/ml 0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存
标准品稀释液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存
酶标试剂3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
样品稀释液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
显色剂A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
显色剂B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
终止液3ml×1 瓶6ml×1 瓶2-8℃保存
浓缩洗涤液(20ml×20 倍)×1 瓶(20ml×30 倍)×1 瓶2-8℃保存
注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:2000、1000、500、250、125、0 pg/ml
人1,25 二羟基维生素D3(1,25 DHVD3)elisa试剂盒说明书 样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20 分钟,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上
清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心
20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次
离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程
中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/
分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞
浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分
2
钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器
将标本匀浆充分。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待
检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样
品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混
匀。
2. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
3. 配液:将30(48T 的20 倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T 的20 倍)倍稀释后备用。
4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此
重复5 次,拍干。
5. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
6. 温育:操作同3。
7. 洗涤:操作同5。
8. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
9. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
10. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值
大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计
算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
11. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
3
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,
在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释
倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值
代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释
倍数,即为样品的实际浓度。
(此图仅供参考)
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为0.990 以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围:
31.2pg/ml -2000pg/ml
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月
温馨提示:不可用于临床治疗。

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