货号: | AS |
数量: | 现货 |
英文名: | 酵母转化试剂盒 |
保存条件: | 低温 |
酵母感受态细胞的制备:
1. 活化菌种。把-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基上划线,在30 ℃培养2-4天。
2. 挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的短线,在30 ℃培养2-4天。待酵母单菌落长至2 mm长时,接种。
3. 首先把酵母细胞接种到3 ml液体YPDA培养基中,30 ℃过夜培养。
4. 第二天转接到含有30 ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养,待OD600到0.4-0.5范围内。收集细胞,1000 g,离心5 min, 去上清。
5. 沉淀用30-50 ml的无菌的去离子水悬浮。1000 g,离心5 min,去上清。
6. 沉淀用合适体积的100 mM LiAc悬浮(30 ml的酵母菌最多用不超过1 ml的100 mM LiAc悬浮,通常100 μl的酵母细胞用于转化一个质粒,即一个反应)。
7. 把酵母细胞的悬浮液分装到1.5 ml的离心管中,每管分装100 μl,用于转化一个质粒即一个反应。1000 g,离心5 min,去上清。制备好的感受态细胞备用。
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