间充质干细胞成软骨诱导分化培养基

★ 技术手册

间充质干细胞成软骨诱导分化完全培养基

★ 产品货号

BW12010

★ 产品描述

根据间充质干细胞成软骨诱导分化的生长需要，培养基包含必需和非必需氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质以及其他补给成分。产品严格无菌，无病毒和支原体，性能稳定。

★ 产品内容

100ml间充质干细胞成软骨诱导分化基础培养基

10ml 间充质干细胞成软骨诱导分化培养基添加剂（CDM-GS）

产品说明书

★ 完全培养基配制

1. 在配制完全培养基前，请把间充质干细胞成软骨诱导分化培养基添加剂（CDM-GS）、青-链霉素(P/S)或庆大霉素放到2～8℃冰箱过夜解冻直到完全溶解后，添加到基础培养基中。

2. 在使用完全培养基前，需要把培养基放到37℃恒温水浴中预热，注意温度不要超过37℃。

3. 请把配制好的完全培养基放在2～8℃冰箱避光保存，并尽量在1个月内使用完。

★ 软骨诱导分化

1. 观察MSC的生长状态，待细胞生长汇合度达到60~80%，吸去培养基，

2. 加入PBS缓冲液，轻轻清洗单层细胞，再吸去PBS，

3. 加入0.25%胰蛋白酶消化3~5min后，加入准备好的完全培养基终止消化，轻轻吹打悬浮细胞。

4. 将MSC移入离心管中，1000rpm离心5min，去除培养基。

5. 加入适量准备好的完全培养基悬浮细胞，血球计数板计数后，在培养器中按细胞密度5×103 cells/cm2接种细胞，将培养器置于37℃，5% CO2的无菌培养箱中培养。每隔2~3天换一次培养基。

6. 在经过特定时期的培养后，软骨分化后的细胞可以被Alcian Blue

染色（诱导分化14天后，见下面的方法）处理分析，以及可以进行基因表达分析、蛋白检测以及免疫分析等。

★ Alcian Blue染色分析

1. 经过14天或者更长时间的成脂分化培养后，去除培养基，用PBS清洗一次，然后再用4%的甲醛溶液固定细胞30 min，

2. 用PBS清洗2次，加入1%的Alcian Blue染色液（溶于0.1M HCl），染色30 min后，用0.1M HCl清洗3次，去处残留的染色液，

3. 在光学显微镜下进行显色观察分析，分化形成软骨细胞合成的蛋白多糖会被染成蓝色。

★ 产品用于

仅供研究使用，不适用于人或动物体外诊断与治疗。

★ 贮藏条件及保存期限

间充质干细胞成软骨诱导分化基础培养基 2～8℃冰箱保存，有效期维持一年。

间充质干细胞成软骨诱导分化培养基添加剂（CDM-GS） -20℃冰箱避光保存，有效期维持两年。

★ 运输

冰袋运输。