点击图片查看原图
土壤材料样品理化检测类服务
单抗制备技术服务
400兆/600兆核磁HMQC检测服务
[VIP第1年] 指数:1
XYLT2-和元
EPN3-和元
NALCN-和元| 提供商： | 科维创 |
CCK试剂盒是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8属于MTT的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，WST-8可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）（图1-2） ，其颜色的深浅与存活细胞数目成正比。使用酶标仪在450 nm波长处测定OD值，可以间接反应活细胞的数量。
CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。
图1. WST-8和WST-8甲攒结构图
图2. CCK-8检测细胞活性原理
产品优势
表1 CCK法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较
| 检测方法 | MTT法 | XTT法 | WST-1法 | CCK法 |
| 甲臜产物的水溶性 | 差（需加有机溶剂溶解后再检测） | 好 | 好 | 好 |
| 产品性状 | 粉末 | 2瓶溶液 | 溶液 | 1瓶溶液 |
| 使用方法 | 配成溶液后使用 | 现配现用 | 即开即用 | 即开即用 |
| 检测灵敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
| 检测时间 | 较长 | 较短 | 较短 | 最短 |
| 检测波长 | 560-600nm | 420-480nm | 420-480nm | 430-490nm |
| 细胞毒性 | 高，细胞形态完全消失 | 很低，细胞形态不变 | 很低，细胞形态不变 | 很低，细胞形态不变 |
| 试剂稳定性 | 一般 | 较差 | 一般 | 很好 |
| 批量样品检测 | 可以 | 非常适合 | 非常适合 | 非常适合 |
| 便捷程度 | 一般 | 便捷 | 便捷 | 非常便捷 |
注：1、酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰；
2、本试剂盒细胞毒性非常低，因此加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。
毒性测试
1、在96孔板中配置100 μl的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。
2、向培养板加入10 μl不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
4、向每孔加入10 μl CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
7、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μl 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。
注：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
细胞活性检测
1、在96孔板中接种细胞悬液（100 μl/孔）。将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37℃, 5% CO2）。
2、向每孔加入10 μl CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。
注意事项
1）建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。
2）有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加入CCK试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数。
3）白细胞可能需要培养较长时间。
4）当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。
5）如果没有450 nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。
6）培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。
活力计算：
细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）] ×100
A（加药）：具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度
A（0加药）：具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力
科维创现推出CCK8细胞增殖试剂盒-免费试用装-限时申领活动！
详情可咨询：
电话：15921847947
QQ：3010252513
邮箱：sales@hanbio.net
欢迎扫二维码关注微信，直接与技术工程师咨询详细服务内容。
