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CRISPR/Cas9基因敲除技术服务


 

CRISPR/Cas9 产品及服务
 

AAV-SaCas9在体敲除技术服务
 
科维创生物技术工程师运用CRISPR/Cas9基因敲除技术，将腺相关病毒与SaCas9结合，即AAV-SaCas9，可以实现高效在体基因敲除，也是最新最领先的在体基因敲除技术。 欲了解AAV不同的血清型及滴度请咨询全国免费服务热线：400-092-0065！

高效极速基因敲除神器-Crispr/Cas9 腺病毒
 

科维创生物创新性的首次将cas9和gRNA整合到腺病毒载体中，成功包装cas9腺病毒和gRNA腺病毒，很大程度上弥补了crispr/cas9质粒感染效率低，从而导致敲除效率低的缺陷。

科维创生物推出的Cas9/gRNA腺病毒利用cas9和gRNA结合特异性，同时借助腺病毒高感染效率，高表达效率，提高crispr/cas9基因敲除效率，缩短基因敲除周期，使得基因敲除周期短，成本低，更易于操作。

Crispr/Cas9 慢病毒

科维创生物独创性研发出慢病毒Cas9表达体系。该体系采用慢病毒体系先在细胞中稳定表达Cas9蛋白，构建稳定表达Cas9蛋白的细胞系，再在该细胞系的基础上导入gRNA和基因敲除实验中用到的其它原件。该体系采用慢病毒体系先在细胞中稳定表达Cas9蛋白，构建稳定表达Cas9蛋白的细胞系，再在该细胞系的基础上导入gRNA和基因敲除实验中用到的其它原件用于特异性基因敲除。

 CRISPR/Cas9 基因敲除原理介绍

CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件。

目前，来自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9 蛋白（含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA 两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。 

由于PAM序列结构简单（5’-NGG-3’），几乎可以在所有的基因中找 到大量靶点，因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞，是目前最高效的基因组编辑系统。 

通过基因工程手段对crRNA和tracrRNA进行改造，将其连接在一起得到sgRNA（single guide RNA）。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力，但因为结构得到了简化更方便研究者使用。通过将表达sgRNA的原件与表达Cas9的原件相连接，得到可以同时表达两者的质粒，将其转染细胞，便能够对目的基因进行操作。

      图示：Cas9通过向导RNA结合到目标DNA上并进行切割 

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