甘油测定试剂盒(液体样品)酶法_试剂_供应

货号：	CY81057
数量：	大量
供应商：	上海超研生物科技有限公司
保存条件：	2-8度
保质期：	6个月
规格：	500次

甘油含量GPO-POD酶法测定试剂盒(500 次)

描述：甘油是甘油三酯的水解产物。甘油三酯水解生成1分子甘油和3分子游离脂肪酸，称为脂肪分解。脂蛋白脂酶水解血中中甘油三酯；胰脂酶水解食物中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶水解脂肪组织中的甘油三酯。与游离脂肪酸一样，甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标。但检测更加方便。本试剂盒采用甘油磷酸氧化酶法与经典GPO Trinder酶学反应¹，通过比色测定液体样品甘油含量。试剂盒经过优化使得操作简单，最低检测灵敏度10 µmol/L，经性范围10~1200 µmol/L，可靠性和重复性俱佳，符合生物医学、食品实验室检测。

测定原理：在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化为3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢；在过氧化物酶作用下生色底物转化为苯醌亚胺，光密度值与甘油浓度成正比。

用途：测定血液、细胞培养基、体液、消化液、各种组织细胞匀浆液、酒类、饮料中的甘油浓度

组成：(1)R1　40ml；(2)R2　10ml；(3) 4 mM甘油标准品1ml；4ºC避光3月。300－500次微板测定或100次1ml比色杯测定。

所需设备：(721、722型)可见光分光光度计、酶标仪、生化分析仪。最佳工作波长550 nm，如无此波长建议优先选用570、530、490nm。比色杯光径1cm。

样本处理

酒类、饮品、清澈体液样本：直接测定，如超过线性范围用蒸馏水或生理盐水稀释后测定。
培养液：取不含酚红无颜色无血清的细胞培养基液，如有细胞碎片应4ºC12,000g离心5min清除，取上清测定。
血液：新鲜抗凝血4ºC 2000 g5 min得到血浆。或非抗凝血4ºC2小时得到血清。2000g10min除去血细胞。70 ºC10min灭活内源性脂蛋白脂肪酶，再次12,000g10min，取上清测定或－20 ºC保存。

配制工作溶液：按4：1比例，取4ml试剂R1与1ml试剂R2混合即可，立即使用或4 ºC保存<1天，变色弃去。

标准品稀释：用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体，将4 mM甘油标准品倍比稀释为1,000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中4－6管即可，注意设置0浓度对照反应管。

甘油测定

参见下表加样。先加标准甘油或待测样品，后加工作溶液。甘油浓度很低时，可尝试样品与工作液体积100:100ul能否进一步增加灵敏度，但样品超过100ul将稀释酶浓度而降低灵敏度。超出线性范围可适当稀释，根据实际稀释倍数计算浓度。
37ºC 20 min（15－30mim）。或25ºC室温反应30min但灵敏度略降。反应平衡后颜色在60min内稳定。
先用蒸馏水空白管调零，然后测定各管OD值。
绘制标准曲线并计算甘油浓度。Excel作图步骤:各标准管OD值为y轴，标准品浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据，点击做图向导，选择“散点图”，点击“完成”。(2)鼠标右键点图上的某一点，点击“添加趋势线”，点击“选项”，点击“显示公式”和“R²值”。

表1 酶标微板测定的加样比例(检测范围10~1200 µmol/L)

（可微量调整样品与工作液体积比例）

	培养基或低甘油浓度样品测定			高甘油浓度样品测定
	空白管	标准管	样本管	空白管	标准管	空白管
蒸馏水/生理盐水	50 µl			5 µl
标准品		50 µl			5 µl
样品			50 µl			5 µl
工作溶液	150 µl	150 µl	150 µl	195 µl	195 µl	195 µl

表2 1 ml比色杯测定的加样比例(检测范围10~1200 µmol/L)

	培养基或低甘油浓度样品测定			血清或高甘油浓度样品测定
	空白管	标准管	样本管	空白管	标准管	空白管
蒸馏水/生理盐水	200 µl			50 µl
标准品		200 µl			50 µl
样品			200 µl			50 µl
工作溶液	600 µl	600 µl	600 µl	750 µl	750 µl	750 µl