细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,可分为间期和分裂期两个阶段。在这一过程中,细胞的遗传物质复制并均等分配给子代细胞。目前,常用PI(碘化丙啶)渗入检测细胞周期:PI是一种双链DNA荧光染料,可以和双链DNA结合产生荧光,且荧光强度和DNA的含量成正比,通过流式细胞仪对DNA含量的测定,可对细胞周期进行分析。通常,G0/G1期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),G2/M期具有四倍体细胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间,通过PI荧光强度的检测可将G0/G1期、S期、G2/M期分开,并得出相应的百分比。
细胞凋亡(apoptosis)是细胞在生理或病理条件下,遵循特定程序发生的程序性死亡。凋亡可通过PI和Annexin V染色进行分析。1)PI染色:细胞发生凋亡时,由于胞浆和染色质浓缩及DNA片段化导致基因组DNA片段在染色过程中丢失,在PI染色时会呈现明显的弱染,在流式检测的荧光图上出现sub-G1峰(凋亡峰)。凋亡早期,细胞对前向角光散射能力显著降低,对侧向光散射的能力增加或无变化;凋亡后期,前向和侧向光散射信号均降低,通过观测细胞光散射的变化对细胞凋亡进行分析。2)Annexin V染色:Annexin V是一种钙依赖性磷脂结合蛋白,可与PS发生特异性结合,正常情况下磷脂酰丝氨酸(PS)位于细胞膜内侧,但发生凋亡时,PS会翻转到细胞膜的外侧。用FITC、PE或biotin标记的Annexin V作为荧光探针可检测细胞凋亡的发生。
二、服务项目及周期
服务编号 | 项目名称 | 周期(工作日) |
CS0001 CS0002 CS0010 CS0011 CS0012 | 细胞培养 药物处理或者病毒感染 MTT绘制细胞生长曲线 MTT检测细胞活力 MTT检测细胞凋亡 | 10 5 5 2 2 |
CS0020 CS0021 CS0022 | 流式细胞术测细胞凋亡和周期(PI) 流式细胞术测细胞凋亡和周期(双染) 流式细胞术检测细胞表面抗原及细胞分选 | 2 2 2 |
CS0030 CS0031 CS0032 CS0033 CS0034 | 划痕愈合实验测细胞迁移 Transwell检测细胞迁移 Transwell检测细胞浸润 细胞粘附实验 克隆形成实验 | 5 5 5 5 5 |
CS0040 CS0041 | 细胞免疫荧光分析 激光共聚焦分析 | 2 2 |
CS0050 | 膜片钳技术检测Ca2+流 | |