NCI-H1581细胞

26、关于反复冻融法裂解细胞的问题：
 
问：用反复冻融法裂解的细胞，是贴壁的还是消化下来的细胞？很多资料上都写着－20度/37度反复冻融三次，但看到过一位生命经纬荣誉版主发的帖子说－80度/37度冻融一次就可以了，请问两者裂解效果有无区别哪，哪种更优？
 
答：冻融裂解细胞是为了得到检测需要的蛋白，细胞是否贴壁都可以这么做，我们采用的是液氮反复冻融三次，要求速冻速解，减少对蛋白活性的损伤。
 
27、2.2.15细胞的相关问题：
 
问：以前听说2.2.15细胞生长都比较缓慢，而且细胞成团，但是我们实验室的2.2.15细胞生长速度特别快，二传一基本一天就能长满，细胞不成团，类似HepG2细胞生长形态，不知道这样的情况是否正常？
 
答：我觉得第一种情况更像2.2.15细胞。我们实验室的2.2.15细胞也是细胞成团，生长慢，且不好养。建议通过RT-PCR，ELISA检测HBV几个重要基因的表达以确定你们实验室的细胞是否是真的2.2.15细胞。
 
28、关于cck－8的使用问题：
 
问：在使用cck－8检测细胞生长抑制率的时候，加完药了，在加入cck－8检查之前需不需要，换一下细胞培养液，再加cck－8？
 
答：如果你的药物不与cck－8试剂反应就不需要换，氧化性药物可能会有一定影响。
 
29、不同结肠癌细胞株之间的区问题：
 
问：请教不同结肠癌细胞株有何不同？各有什么特性？可以从什么书籍或资料能找到答案？
 
答：WiDr:Disease:colorectal adenocarcinoma Antigen Expression：HLA A24,A32,B15,B18.
 
COLO 320DM:Disease:colorectal adenocarcinoma Comments:The line is negative for CEA, CSAp and colon antigen 3.The cells are weakly positive for keratins and vimentin.
 
COLO 320HSR[COLO 320 HSR]:Disease:colorectal adenocarcinoma Comments:CEA,negative.CSAp, negative.Colon antigen 3,positive.The cells are weakly positive for keratins and vimentin.
 
更多请查看ATCC搜索后的网址，共有近20余种结肠癌细胞株及相关特性描述。
 
30、问：我想TUNEL法检测细胞凋亡，哪个公司的产品比较好？
 
答：当然是进口的好，但如果你做动物的话国产的比较便宜合算。
 
31、概念性问题：
 
问：请教一下概念性的问题：胃黏膜上皮细胞、胃上皮细胞、上皮细胞之间的包含关系？或者其中两者是等同的？
 
答：全部胃粘膜表面(包括胃小凹表面)均覆以单层柱状上皮。上皮细胞能分泌粘液，可在粘膜表面形成粘液－碳酸氢盐屏障(后述)与胃粘膜屏障(后述)共同起重要保护作用。这里得胃黏膜上皮细胞和胃上皮细胞其实是等同的；上皮细胞的概念就大了。
 
32、小鼠脾T细胞的培养问题：
 
问：(1)正在进行小鼠脾T淋巴细胞培养，发现长得很慢，想问：用哪种进口胎牛血清要好一些？我用了CD3、CD28抗体，IL-2用多少单位比较好？
 
答：小鼠脾T淋巴细胞是终末分化细胞长的当然很慢，血清的话用进口的和国外的都可以。但要先实验，有些进口血清对T淋巴细胞增殖有影响。CD3、CD28抗体用5－10µg/ml的量包被96孔板然后作用。IL-2浓度为10-30ng/ml，不同公司的产品不同，要摸索一下条件，最好找一篇文章，然后跟它买一样的产品，来做。
 
问：(2)我培养的是调节T细胞。回答中“有些进口血清对T淋巴细胞增殖有影响”是指什么？你说IL-2浓度为10-30ng/ml，是根据你的经验，还是文献记载？我查了很多文献，有用人的IL-2，有用鼠的IL-2，用鼠IL-2的浓度差别太大，从2ng至30ng都有。我用的是peprotech公司的。
 
答：某些进口血清或是某些产品的某些批次会对T淋巴细胞增殖有影响，可能出现不增殖的结果，有些淋巴细胞细胞在里面长不好，甚至死亡。血清成分太复杂，原因不好说。整个实验最好使用同一批血清，在用前，先预实验(可以用丝裂原做非未处理的细胞)确定没问题，再用。国产血清也是一样。剂量方面我做的主要是PBMC或是脾细胞，没有进一步分选，不加IL-2。上面的主要是从文献上看的。
 

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