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细胞elispot检测

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发货时限:
暂无
所在地区:
中国上海
有效期至:
长期有效
最后更新:
2021-04-06 01:30:02
浏览次数:
28
企业信息

产品详情

品牌名称:
提供商: 沃登医学
服务名称: 细胞elispot检测

细胞elispot检测

 一、服务介绍
 
    随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用,使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用酶联免疫吸附法(ELISA)检测体液中游离的细胞因子(CK)或抗体。但由于游离的循环抗体或CK的半衰期不同,使之在体液中不断的被代谢或与靶器官结合,而不能确切的反映体内的抗体及CK的水平。上世纪80年代,国外的科研工作者根据ELISA技术的基本原理,建立了体外检测特异性抗体分泌细胞和CK分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术。
      本公司利用特异单克隆抗体捕获细胞受到刺激后局部产生细胞因子。细胞分解后, 被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合,其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后,PVDF孔板出现“紫色”的斑点表明细胞产生了细胞因子,通过ELISPOT酶联斑点分析系统对斑点的分析后得出结果。

 

 
二、服务内容
 
1.培养板的预处理:在24孔培养板内加0.5ml 0.2%戊二醛,37℃,4h,弃掉板中的处理液,用PBS洗涤3次,每次3min;

2.抗原包被:将适量抗原溶于包被缓冲液中,每孔加入0.5ml,4℃过夜,PBS-T洗涤3次,每次3min;

3.制备细胞悬液:将待测已致敏小鼠处死,取出脾脏,置于加有Hanks液的小平皿内,用钝头直角9号注射器针头破少许脾被膜后,赶出细胞,用毛细吸管轻轻吹散细胞团后,将悬液通过250目尼龙网,取滤液,1000r/min离心5min,Hanks液洗涤3次,计数细胞后,用1640液重新悬浮细胞,配成所需浓度;

4.往各孔中加入0.5ml含不同浓度(104-106/ml)的细胞悬液,置37℃,5%CO2条件下孵育2-4h,弃掉培养液,PBS-T洗涤3次,每次3min;

5.往各孔中加入0.5ml生物素化抗体(Bio-Ab)(2μg/ml),37℃孵育1h或4℃过夜,弃掉液体,PBS-T洗涤3次,每次3min;

6.加入辣根过氧化物酶结合的亲合素(Avi-HRP)(2μg/ml),37℃孵育30min,弃掉液体,PBS-T洗涤3次,每次3min;

7.配制明胶-底物液:在37℃水浴中,将2.5mlTMB溶液(4mg/ml甲醇溶液)滴加入7.5ml10%明胶溶液(用pH5.0磷酸钠-柠檬酸缓冲液配制)边加边搅,溶液呈白色,加入14μl 3% H202

8.显色与计数:将培养板底冰浴,每孔加入0.6ml明胶-底物液,约3min,混合液凝固,将培养板取出,置室温5min,将板倒置,用肉眼和低倍放大镜计数所显示出的颜色斑点。

 
 
ELISPOT检测试剂盒

 

三、服务说明

1. 客户提供:待检测细胞等相关实验用品(如需公司提供请说明);
  
2. 实验周期:1周;

3. 若另有疑问欢迎向本公司咨询,我们将竭诚为您服务。
 


四、质量承诺
 
1,权威完整的ELISPOT检测报告;
 
2. 真实的原始实验数据;
 
3. 详细的实验步骤。

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