货号: | 001 |
数量: | 大量 |
保质期: | 12个月 |
英文名: | SUPER Green I nucleic acid gel stain *10,000× concentrate in DMSO* |
保存条件: | 4°C干燥避光保存 |
规格: | 50 μL |
目录号 | 产品名称 | 中文名称 | 规格 | 价格 |
001 | SUPER Green I nucleic acid gel stain *10,000× concentrate in DMSO* (Electrophoresis Grade) | SUPER Green I (效果同SYBR Green I)核苷酸胶体染料(10,000× DMSO溶液)(电泳级) | 50μL | 100.00 |
002 | SUPER Green I nucleic acid gel stain *10,000× concentrate in DMSO* (Electrophoresis Grade) | SUPER Green I (效果同SYBR Green I)核苷酸胶体染料(10,000× DMSO溶液)(电泳级) | 100μL | 180.00 |
SUPER Green I (10,000× DMSO溶液,电泳级)
本品用DMSO溶解,因DMSO的熔点是18.5℃,使用前请放置到室温充分溶解。
SUPER Green I 核酸染料特点
● 无毒性:属花箐类染料,容易生物降解,无致癌毒性。
● 灵敏度高:至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25~100倍。
● 信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。
● 操作简单:无须脱色或冲洗,即可直接用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观察。
● 适用范围广:可适用于多种凝胶电泳方法:琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉
冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等。
● 使用方便:对分子生物学中常用的酶(如:Taq 酶、反转录酶、内切酶、T4连接酶
等)没有抑制作用。
● 经济:价格比银染便宜。
SUPER Green I 使用方法简介
1.胶染法(用法同EB) (推荐方法,见图1)
(1) 制胶时加入SUPER Green I 核酸染料。冷却胶至50℃左右,每100mL胶中加入3~5μL SUPER Green I 核酸染料。
(2) 按照常规方法进行电泳即可。
注:此方法染色可以准确确定核酸片段分子量,染料用量相对较少。1mL染料大约可以做300块100mL的胶。
2.点染法 (见图3)
(1) 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。
(2) 工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的SUPER Green I 稀释100倍,即为SUPER Green I 工作液。SUPER Green I 工作液可以置2~8℃保存一个月以上。
(3) 制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。
(4) 样品染色:向分析样品中加入SUPER Green I 工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使SUPER Green I 与样品中DNA充分结合。SUPER Green I 工作液加入量为总上样量的1/5~1/10。
(5) DNA Marker染色:将5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀释液和1μLSUPER Green I 工作液混匀,室温放置5分钟,使SUPER Green I 与DNA充分结合。
(6) 上样、电泳:按常规操作。
注:用点染法染色时,灵敏度最高,染料用量最少。但大片段稍有滞后现象,如果需要更准确确定分子量(与Marker对比),建议使用胶染法。
3.泡染法
(1) 按照常规方法进行电泳。
(2) 用pH7.0~8.5 的缓冲液(如:TAE,TBE 或 TE),按照10000﹕1的比例稀释SUPER Green I 浓缩液,混匀,制成染色溶液。
(3) 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10~30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上,让稀释液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
注:用泡染法染色时,可以精确确定核酸片段分子量。但染料用量是三种方法中最多的。
4. 点染+胶染法(见图2)
此法结合方法1和方法2,灵敏度最高,对于低浓度样本比EB检测更灵敏。
几种染色方法特点比较
特点 染色方法 | 灵敏度 | 染料用量 | 确定片段分子量精确度 |
胶染法(推荐方法) | 较高 | 较少 | 较高 |
点染法 | 很高 | 最少 | 大片段稍有滞后 |
泡染法 | 较高 | 最多 | 最高 |
点染+胶染法 | 最高 | 较多 | 大片段稍有滞后 |
SUPER Green I使用注意事项
(1) 在SUPER Green I 点染法中,电泳时间不要超过2小时,否则SUPER Green I 会从DNA上分离出来,会产生弥散状条带。
(2) 用点染方法染色时,条带稍有滞后现象,如果需要确定片段精确分子量(与Marker对比),建议使用胶染法(方法1)。
(3) 在常规用酒精沉淀核酸的过程中,SUPER Green I 可以全部从双链核酸上去掉。
(4) 如果想对用 SUPER Green I 染过的胶进行 Southern blots,建议在预杂化和杂化溶液中加入 0.1%~0.3% 的SDS。
(5) 在紫外照射透视下,与双链 DNA 接合的 SUPER Green I 呈现绿色荧光。如果胶中含有单链 DNA 则颜色为橘黄而不是绿色。
(6) SUPER Green I 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。
EB和SUPER Green I胶染法对比图。每孔道分
别上DNA marker 2000 10μL,5μL及2.5μL。
图1 胶染法
EB胶染和SUPER Green I胶染+点染对
比图。每孔道分别上DNA marker 2000 10μL,5μL及2.5μL。
图2 胶染+点染法
EB和SUPER Green I点染法对比图。分别加1/10
体积上样的染料,室温静置5分钟,之后每孔道
分别上DNA marker 2000 5μL,2.5μL及1.25μL。
图3 点染法