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ARRb1重组蛋白

产品价格: ¥1080.00

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暂无
所在地区:
中国上海
有效期至:
长期有效
最后更新:
2018-03-20 18:39:58
浏览次数:
8

产品详情

品牌名称:
HZbscience
货号: HZ-ARRb1-0
供应商: 沪震生物
数量: 20
英文名: Recombinant Arrestin Beta 1 (ARRb1)
保质期: 12个月
保存条件: 2-8°C不超过一个月,-80°C不超过12个月
规格:
ARRb1重组蛋白主要有原核表达系统和真核表达系统和无细胞表达系统。
英文名称:Recombinant Arrestin Beta 1 (ARRb1)
ARB1; ARR1; ARR-B1; Arrestin 2 
仅供体外研究使用,不用于临床诊断!请索取进口关税税单及报关单!
物种Homo sapiens (Human,人)相同的名称,不同的物种。来源原核表达宿主E.coli内毒素水平<1.0EU/µg(LAL法测定)亚细胞定位细胞膜, 分泌预测分子量25.9kDa实际分子量28kDa(差异分析请参阅说明书)片段与标签Arg25~Ser234 with N-terminal His Tag缓冲液成份20mM Tris, 150mM NaCl缓冲液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)性状冻干粉纯度> 90%等电点8.2应用Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.如果需要有生物活性的蛋白,请参见活性蛋白。规格10ug50ug200ug1mg1g
用法:Reconstitute in 20mM Tris, 150mM NaCl (pH8.0) to a concentration of 0.1-1.0 mg/mL. Do not vortex.
ARRb1重组蛋白储存:避免反复冻融。2-8°C不超过一个月,-80°C不超过12个月。
稳定性:热稳定性以损失率显示。损失率是由加速降解试验决定,具体方法如下:在37°C孵育48小时,没有显著的降解或者沉淀产生。保质期内,在适当的条件下存储,损失率低于5%。
QQ图片20171016093022
ARRb1重组蛋白原核表达鉴定详细实验步骤
1. 表达鉴定第一天的任务,常用抗性选择根据感受态细胞选择
1)拿到质粒,离心(3000r/min;2min) · 在质粒中加入 TE【使质粒最终加入到 110μL 感受态细胞中的量为 80-100ng,据此确定加入 TE 的量】,一
般为(1μg 质粒加 20μLTE;2μg 质粒加 50μLTE;5μg 质粒加 100μL TE) · 将质粒与 TE 混匀,吸取 2μL 混液与感受态细胞混匀
2)将感受态细胞放入冰箱(4℃)中,30min
3)取出后立即放入水浴锅中(42℃),热激 90s,
ARRb1重组蛋白活性蛋白整体方案Active Protein Solutions
 4)再次放入冰箱(4℃)中,3min
5)拿出后取 200μL 的 LB 液体培养基加入到已转入质粒的感受态细胞中
6)放入摇床(37℃; 195r) 中, 30nim 至 60min; (最佳 45min)
7)取出离心(3000r/min;2min) · 去掉 200μL 的上清,留 100μL 左右上清悬浮沉淀,吸取 50μL 悬液涂平板,【先将对应抗性的平板放入培养箱(37℃)中预热 20min】
8)把平板放入培养箱(37℃),过夜(12h 至 16h)
2. 表达鉴定第二天的任务,注意 Pcold 表达载体的表达温度
1)每个平板挑取单菌落至 4 支对应抗性的 LB(4ml)试管中,编号为“0”“1”“2”“3”
2)将试管放入摇床(37℃;195r) 中,【单抗 3h 左右;双抗 4h 左右;刚开始用可见分光光度计测 OD 值;熟练后可目测(背光下,以试管中的枪头为例,刚刚看不见枪头即可)】,测 OD 值(0.6 至 0.8)
3)从“0”号管中取 700μL 悬液加入到 100μL(C=80%)的保种甘油中,震匀,放入冰箱(-20℃)冻存
4)在每组菌的“1”“2”“3”号试管中分别加入 2μL 的 IPTG【终浓度 0.5mM 最适,可根据日后表达摸索】
5)视不同的载体选择适合的表达环境【PET/PGEX:15℃表达过夜;25℃表达 6h;37℃表达 3h 至 4h(4 支
试管,“0”“1”号试管 15℃表达过夜;“2”“3”试管 37℃表达 3h 至 4h)。Pcold:【全部 15℃表达过夜】
3. 表达鉴定第三天,全菌的表达鉴定分析,注意控制溶质的量及溶液黏度
1)从每组 4 支的试管中均取 500μL 菌液加入到 1.5ml 离心管中,【若 OD 值不一样,值小的可多取】离心
(6000r/min),5min, 去上清,留沉淀【沉淀少的,可再取菌液离心,尽量使沉淀量接近】
2)在每个离心管中加入 500μL 的 DDH2O,悬浮沉淀,离心(6000r/min),5min, 去上清,留沉淀
· 在每支离心管中加入 45μL 的 1×PBS 和 45μL 的 2×Loading Buffer 悬浮沉淀【当溶质适量且均一的情况
下,加入量不变;当溶质多且粘稠时,应使加入量增大,为降低粘度也可减少上液量】
3)放入煮样器(100℃) 25min
4)取出后离心(6000r/min) 3min, 电泳检测。
5)蛋白表达量不错,进行蛋白纯化;蛋白表达量低或者没表达,可参考原核表达 FAQ 相对应解决方案解决。
4. 蛋白纯化:见蛋白纯化专题。
ARRb1重组蛋白为什么要纯化:
重组蛋白一般用转基因动物的乳腺产生,所以获得的重组蛋白是存在于动物的乳汁当中的。而显然在乳汁中存在大量不同种类的蛋白、糖、脂肪等物质,所以为了获得高纯度的重组蛋白,必须对获得的乳汁进行抽提和纯化。
在原核蛋白表达体系中,如 E.coli(大肠杆菌表达系统),外源基因通常需要诱导剂的诱导才能进行表达,本文详细讲述了常用诱导剂 IPTG 诱导原理,对外源蛋白诱导表达原理以及实验步骤。
原核生物绝大多数的基因按功能相关性成簇地排列,且密集于染色体上,共同形成一个转录单位——操纵子,也称基因表达的协同单位。E.coli 的乳糖操纵子含 Z、Y 及 A 三个结构基因,分别编码β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)、通透酶(permease)和乙酰基转移酶(transacetylase);此外还有调控基因:操纵序列 O(operator)、启动序列 P(promoter);而 I(编码 Lac 阻遏物,Lac repressor)不属于乳糖操纵子。
温馨提示:不可用于临床治疗。

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