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2D双向凝胶电泳实验服| 提供商： | 基云（上海）生物技术有限公司 |
| 服务名称： | MRM/SRM靶向蛋白绝对定量技术服务 |
技术概述
质谱多反应监测技术/选择反应监测（MRM/SRM）是对复杂混合物中目标蛋白质进行准确定量的重要技术手段。MRM/SRM作为一种质谱检测的分析方法，具有特异性强、灵敏度高、准确度高、重现性好、线性动态范围宽、自动化高通量的突出优点，是目前最灵敏的质谱检测模式，被誉为质谱的“金标准”。
通过MRM/SRM技术进行实时的定量监测可以进行药代动力学研究、临床诊断、违禁药物检查、食品化妆品等工业质量控制、环境检测、农业植物学研究以及代谢组学和基于蛋白组学的生物标志物发现、蛋白质翻译后修饰等相关研究。
技术原理
MRM/SRM技术是一种基于已知或假定的反应离子信息，有针对性地选择数据进行质谱信号采集，对符合规则的离子进行信号记录，去除不符合规则离子信号的干扰，通过对数据的统计分析从而获取质谱定量信息的质谱技术。
该方法首先检测到具有特异性的母离子，然后只将选定的特异子离子进行质谱信号的采集。最终，通过合成同位素形成的目标肽段，将已知浓度的内标肽与待测样品混合，选择特定母子离子对获得不同的色谱检出信号，比较两者的信号强度值，实现目的蛋白质的绝对定量。
技术优势
- 质谱定量方法的金标准，被称为“基于质谱的ELISA”;
- 当今基于质谱重现性最好的技术
- 通量高，一次实验可以平行定量几十到几百个蛋白;
- 重复性高，可以实现四个数量级的定量，变异小;
- 不需要抗体，因此适用于验证及定量因缺少抗体而无法采用werstern或者ELISA进行定量的蛋白，如同源较高的蛋白家族，带有翻译后修饰蛋白（如磷酸化，甲基化蛋白等等），植物、微生物、模式生物的蛋白
实验流程
客户案例
应用领域
- iTRAQ实验中差异蛋白后续验证;
- Label free 差异蛋白后验证;
- 蛋白绝对定量;
- 肽段绝对定量;
- 疾病标志物定量，建立诊断模型;
- 磷酸化蛋白定量，甲基化蛋白定量;
- 其他翻译后修饰蛋白定量;
- 通路整体蛋白定量分析。
送样须知
蛋白提取物：浓度>1μg/μl，蛋白质总量 >300μg；
细胞样品：细胞量>107次方；
组织样品：动物、微生物组织湿重>50mg | 植物组织>1000mg ；
体液样品：血液体积>500μl。
参考论文
[1] Chen Chen, Xiaohui Liu, Weimin Zheng, Lei Zhang, Jun Yao, and Pengyuan Yang，Screening of Missing Proteins in the Human Liver Proteome byImproved MRM-Approach- Based Targeted Proteomics ，Journal of Proteome Research 2014, 13, 1969-1978
[2] Han Sun, Chen Chen, Baofeng Lian, Menghuan Zhang, Xiaojing,Wang, Bing Zhang, Yi-Xue Li, Pengyuan Yang, and Lu Xie Identification of HPV integration and gene mutation in HeLa cell line by integrated analysis of RNA-Seq and MS/MS data J. Proteome Res., Just Accepted Manuscript • Publication Date (Web): 20 Feb 2015
[3] Picotti P, Aebersold R. Selected reaction monitoring-based proteomics: workflows, potential, pitfalls and future directions. Nature Methods. 2012; 9(6): 555-66.
[4] Addona TA, Shi X, et al. A pipeline that integrates the discovery and verification of plasma protein biomarkers reveals candidate markers for cardiovascular disease. Nature Biotechnol. 2011; 29(7): 635-43.
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