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T4 快速连接酶

产品价格: ¥500.00

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发货时限:
暂无
所在地区:
中国北京
有效期至:
长期有效
最后更新:
2021-05-30 01:30:16
浏览次数:
53

产品详情

品牌名称:
NLX
货号: TL-001-1
规格: 100uL
产品描述:T4 DNA连接酶常用于催化双链DNA平末端或互补粘性末 端之间的连接反应,也能催化双链RNA 5'-磷酸末端和3'-羟基 末端间的连接。还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂 交双链中的单链切口。以上反应均需消耗ATP。 
保存温度:-20℃
产品包装:2XT4 快速连接酶 100μl(20次)  
产品特点:该酶包含T4 DNA连接酶酶、Buffer、ATP增强剂等,优势组合,独特配方提供给您更简捷快速的实验。而使用2XT4快速连接酶,16℃过夜连接可获得最高的连接效率; 在室温(25℃)下,仅需5-15分钟即可完成粘性末 端或平滑末端DNA片段的连接反应。 
质量保证:经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的 条带;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。 
活性定义:在20 ml的连接反应体系中, 6 mg的λDNA-Hind III的分解 物在16℃下反应30分钟时, 有90%以上的DNA片段被连接 所需要的酶量定义为1个单位。
产品用途:DNA片段和载体DNA的连接。DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。 
快速连接步骤:取50 ng载体和3倍摩尔量的插入片段,加入2XT4快速连接酶 5ul,混匀。用双蒸水调整总体积为10 ul,充分轻柔混匀(切勿剧 烈震荡,可能导致酶部分失活),置于室温 (25℃) 作用5-15分钟。冰上放置,转化(如不立即进行转化实验请冻存 于-20℃)
 使用建议:粘末端的连接反应: 插入片段和载体的摩尔浓度比特别重要,此比例在2-6之间最好,低于2:1就会导致较低的连接效率,高于6:1则会导致多个插入。摩尔比请按载体与插入片段 DNA浓度及分子大小来计算。平滑末端的连接反应: 平滑末端的连接反应与突出末端 相比反应较慢(其Km值约为突出末端的100倍)。进行平滑末 端的连接反应时,可提高DNA浓度,将使用酶量增加到突出 末端量的2-5倍左右。 向粘粒或噬菌体进行连接反应:可使载体和插入DNA的摩尔比调整为1:1,同时增大DNA浓度以便取得良好效果。 反应温度:该酶的最适温度为37℃,由于热稳定性较差,因此长时间反应时通常需在16℃下进行,若反应1-2小时 左右的话也可在室温下进行反应。 
抑制剂:T4 DNA连接酶要求Mg2+,因此螯合Mg 2+的EDTA 的存在会阻碍反应。将溶解于含有高浓度EDTA缓冲液中的 DNA准备作为样品使用时,最好先用灭菌蒸馏水或TE缓冲液进行置换。
温馨提示:不可用于临床治疗。

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