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组织及血液碱性磷酸酶测定试剂盒

产品价格: ¥190.00

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暂无
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全国
有效期至:
长期有效
最后更新:
1970-01-01 08:00:00
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74

产品详情

品牌名称:
 产品内容:

提取液:液体30mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体30mL×1瓶,4℃避光保存,变成蓝绿色不能使用。

标准品:液体0.5mL×1支,2μmol/mL酚标准液,4℃保存。

产品说明:

AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的***脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。

在碱性环境中,AKP/ALP催化***酸***二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替比林和铁*化钾反应红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510 nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。

自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、 粗酶液提取

称取约0.1g组织,加提取液1mL充分研磨,4℃10000rpm离心10min,取上清液待测。血液可直接用于测定,或者适当稀释后用于测定

二、 测定操作:

1.分光光度计预热30 min以上,调节波长到510 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂置于37水浴中预热30 min以上。

试剂名称(μL

测定管

对照管

空白管

标准管

蒸馏水

-

-

20

-

2μmol/mL标准品

-

-

-

20

上清液

20

-

-

-

试剂一

200

200

200

200

试剂二

200

200

200

200

混匀后置于37℃水浴中保温15min

试剂三

600

600

600

600

上清液

-

20

-

-

混匀后于510 nm测定吸光度,分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。

 

三、AKP/ALP活性计算: 

 

1.按蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μmol为一个酶活力单位

AKP/ALP (U/mg prot)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V]÷(Cpr×V)÷T

                   =0.133×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr

2.按样本鲜重计算

活性单位定义:37℃中每克组织每分钟催化产生1 μmol为一个酶活力单位

ACP活力(U/g鲜重)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V] ÷(W÷V提取×V)÷T=0.133×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷W

3.血液中ACP活性计算

活性单位定义:37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol为一个酶活力单位

ACP活力(U/mL)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V] ÷V样÷T

               =0.133×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)

    C标准品:2μmol/mLV反总:反应体系总体积(mL),1020μL=1.02mLV样:加入反应体系中上清液体积(mL),0.02mLT:反应时间(min),15 minV提取:加入提取液体积,1mLW:样本鲜重,gCpr:样本蛋白浓度,mg/mL

注意事项:

1试剂、试剂和试剂均需避光保存。

2试剂变蓝绿色后不能再使用。

3加入试剂后必须立即混匀,否则显色不完全。

 

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