本试剂盒采用酶谱法(zymography)检测 MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一种广为使用的、基 于 SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达 1 nM，高于 ELISA 方法 2，其 基 本原理和程序是：制备加有胶原酶底物的 SDS-PAGE 凝胶，含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电 泳， 电泳结束后取出凝胶与酶反应 Buffer 孵育，凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深 染，形 成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色 而形成透 亮区域，从而能同时指示 MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。
本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至 0.1~0.5 µl 血液中的 MMP-2、MMP- 9 酶谱及活性，检 测灵敏度~1 nM。试剂盒可进行 50 次标准小胶检测，如果小胶加样孔为 10~15个，则总计可检测 500~750 个样品。
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染色步骤：
1. 此染色液即为工作液，使用时直接将聚丙烯酰胺凝胶放在培养皿中以考马斯亮蓝染色液覆盖凝 胶，并缓慢摇动 2h；
2. 倾去染色液，用脱色液冲洗凝胶；
3. 以脱色液覆盖凝胶，缓慢摇动 2h，倾去脱色液，再加入新脱色液进行脱色，直至获得清晰的 蓝色的条带和干净的背景（通常此过程需要 2～4h，也可脱色过一夜至清晰的蓝色的条带和干净 的背景）；
4. 对凝胶进行分析和照相，凝胶可放置在 7％的乙酸中保存。也可用凝胶干胶装置（P2000）对 凝胶进行处理后保存。
安全性：含有甲醇，无特殊毒性，按一般化学品操作规程处理。
说明：
1. 染色液配方：0.25g 考马斯亮蓝 R250 420ml 甲醇 100ml 冰乙酸，定容至 1000ml，混合 1h 后用 Whatman 1 号滤纸过滤，于室温可无限期保存；
2. 脱色液配方：冰醋酸:甲醇:水＝7:5:88（V:V:V）；
3. 保存液：7％冰醋酸；
4. 凝胶染色之后，染色液可以回收利用，装入新容器内，室温或 4 ºC 保存，可反复使用 2-4 次。
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