小鼠甘露糖(Mannose)试剂盒操作中最重要的是什么?_技术交流_仪器仪表技术文献

提供者:15453839343  发布时间:2018/11/26  阅读次数:91次  

小鼠甘露糖(Mannose)试剂盒操作中最重要的是什么?


ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。



甘露糖,目前唯一用于在临床上的糖质营养素,广泛分布于体液和组织中,尤其是在神经、皮肤、睾丸、视网膜、肝和肠。其直接被利用合成糖蛋白,参与免疫调节。许多疾病正是由于缺乏甘露糖糖化作用中的酵素而导致的。
其在人体内生理效应如下:

1)调节免疫系统

2)巨噬细胞表面有4种接受器可以捕捉抗原,都有甘露糖成分

3)增加伤口愈合

4)抗发炎效果

5)抑制肿瘤生长与转移,增加癌症存活率

6)可以避免某些细菌感染,如泌尿道感染


操作方法:

1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
400pg/ml5 号标准品150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
200pg/ml4 号标准品150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
100pg/ml3 号标准品150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
50pg/ml2 号标准品150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
25pg/ml1 号标准品150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl, 然后再加待测样品 10µl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.配液:将 2 0 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 2 0 倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。

7.温育:操作同 3。

8.洗涤:操作同 5。

9.显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.

10.终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。


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elisa试剂盒:进口ELISA试剂盒,国产ELISA试剂盒,人elisa试剂盒,大鼠ELISA试剂盒,小鼠ELISA试剂盒等。
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血清:胎牛血清,人血清,动物血清,NQBB,Hyclone,Gbico原装血清 。
生物试剂:Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等进口试剂。
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