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CHO稳定细胞系蛋白纯化技术服务
医学代谢组学检测分析
维生素靶向定量检测
[VIP第1年] 指数:3
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(原核)可溶蛋白表达实
蛋白质纯化实验服务
MALDI-TOF/TOF质谱鉴
DIGE技术实验服务
多肽合成与修饰技术服
蛋白双向2D-WB 电泳实
病理切片实验技术服务| 简介： | NF-KB p65活性检测实验 |
| 提供商： | 晶莱生物 |
| 服务名称： | NF-KB p65活性检测实验 |
| 地区： | 上海 |
| 规格： | 实验服务 |
 【晶莱生物】核转录因子NF-kappaB（NF-kB）是一种重要的转录因子，参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。 NF-kappaB（NF-kB）最初被鉴定为在B细胞中和免疫球蛋白k轻链的增强子结合。但随后在非B-细胞的细胞质中被发现，形成NF-kB和IkB的复合物。最初在DNA结合蛋白复合物中分离的NF-kB是由p65(RelA)和p50构成的异源双聚体。其他分离的单体包括p49（也可称为p52），p75（c-Rel）,p68(RelB)。p65，p68，p75单体起反式激活作用。p50，p49（p52）单体具有DNA结合活力，但只具有微量的反式激活作用。据报道p49和NF-kB的单体p65形成具有转录活力的异源双体，类似于p50/ p65异源双体。p49/ p65和p50/ p65异源双体在细胞质中受一种叫IkBa/MAD-3的抑制剂调节。 IkB和p65单体结合，阻制了细胞核中的定位和DNA的结合。在体外高浓度的p65能形成同源双聚体，能和DNA微弱地结合。Poly(dI:dC)能抑制这一反应（14）。p49和p50也能形成同源双聚体，但在细胞中的浓度很低。通常，在作NF-kB的凝胶迁移实验时，在20ul的反应体积中，有溶于10 mM HEPES的0.28pmoles 的NF-kB9寡核苷酸（pH7.9), 50mMKCl, 0.2mMEDTA, 2.5mM DTT, 10%甘油, 0.05%NP-40。当用纯化的蛋白时，250-300ng足以形成凝胶迁移复合物，而需用10ug的HeLa细胞核抽提物。凝胶迁移复合物在室温中保温30分钟，在50mMTris(pH8.3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离凝胶迁移复合物。含考马斯兰和二甲苯蓝色素的加样溶液只能加入到阴性对照反应中，因这两种色素会加剧NF-kB复合物的解离。当用HeLa细胞核抽提物作为结合蛋白来源时，可形成两种序列特异的凝胶迁移复合物，即p50/p50同源双聚体和p50/ p65异源双聚体。在表达p49，p50，p65的细胞中，可检测到4个序列特异的凝胶迁移复合物（p49/ p49，p50/ p50，p50/ p65，p49/ p65），如果存在高浓度的p65，可检测到微量的p65/p65。 下列试剂可加强NF-kB在体外的结合：mM的GTP，ATP，精胺，亚精胺，钡或钙离子，ng的Co+3(NH3)6（12）。 提取组织或细胞核蛋白，利用不同形式的NF-Κb p65抗体捕获细胞核蛋白并加以区分，通过酶标仪450nm处测定核蛋白标准品与NF-Κb p65吸光度值，进行定量比较，从而明确目的蛋白的活化度。 收费标准/服务周期/提供结果： 欢迎咨询详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。 更多实验技术服务请浏览网站其他内容，或来电咨询！ 做实验，找晶莱！您的科研生涯，我们一路相伴！ 【平台项目开展范围】慢病毒，腺病毒，RNAi类，分子生物实验，病理实验，免疫学实验，细胞实验，动物实验，蛋白组学实验，芯片类实验，并为广大客户朋友们提供课题设计指导、基金申请指导、SCI、核心期刊等服务。 全国统一咨询服务热线:4008-766-085 【上海公司】上海市嘉定区槎溪路788弄1号17层 【北京公司】北京市大兴区科创十四街嘉捷·BDA企业汇16号楼三层 【长沙公司】长沙市高新区麓谷大道627号新长海中心B2-403室 【技术咨询】18500539084 【公司邮箱】lab-china@genelb.cn 【全国业务咨询】北京：18810244671 上海：15800916241 长沙：15616228964 武汉：15201856307 西安：13651049420 广州：18810244571 其他地区：13818286017 【晶莱生物】已开展了数千个实验外包项目。我们专注于医学课题研究，已从课题申请、方案设计、试剂采购、模型构造、标本检测、数据分析、以及对SCI撰写与发表的支持，各个环节积累了数千个成功案例经验，为数千个来自临床的科研工作者解决了大量的科研问题。更多相关实验服务信息请咨询晶莱生物技术人员 |
